[發(fā)明專利]T細(xì)胞受體基因修飾小鼠

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201280064216.3
• 申請(qǐng)日: 2012-10-26
• 公開（公告）號(hào): CN104011071B
• 公開（公告）日: 2017-11-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: L·麥克唐納;A·J·莫菲;J·麥克沃克;N·圖;V·沃羅寧那;C·古雷爾;K·梅格爾;S·史蒂文斯
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 瑞澤恩制藥公司
• 主分類號(hào): C07K14/705
• 分類號(hào): C07K14/705;A01K67/027
• 代理公司: 北京商專永信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)11400
• 代理人: 鄔玥,葛強(qiáng)

1.一種制備基因修飾的嚙齒動(dòng)物的方法，包含修飾所述嚙齒動(dòng)物基因組以包括：

未經(jīng)重排的T細(xì)胞受體(TCR)α可變基因基因座，其包括至少一個(gè)未經(jīng)重排的人源Vα區(qū)段和至少一個(gè)未經(jīng)重排的人源Jα區(qū)段，其中所述未經(jīng)重排TCRα可變基因基因座與內(nèi)源性嚙齒動(dòng)物TCRα恒定基因序列可操作地連接，其中所述未經(jīng)重排的TCRα可變基因基因座取代內(nèi)源性嚙齒動(dòng)物TCRα可變基因基因座，和/或

未經(jīng)重排的TCRβ可變基因基因座，其包括至少一個(gè)未經(jīng)重排的人源Vβ區(qū)段、至少一個(gè)未經(jīng)重排的人源Dβ區(qū)段和至少一個(gè)未經(jīng)重排的人源Jβ區(qū)段，其中所述未經(jīng)重排的TCRβ可變基因基因座與內(nèi)源性嚙齒動(dòng)物TCRβ恒定基因序列可操作地連接，其中所述未經(jīng)重排的TCRβ可變基因基因座取代內(nèi)源性嚙齒動(dòng)物TCRβ可變基因基因座。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中內(nèi)源性嚙齒動(dòng)物Vα和Jα區(qū)段無法重排以形成經(jīng)重排的Vα/Jα序列，和/或內(nèi)源性嚙齒動(dòng)物Vβ、Dβ和Jβ區(qū)段無法重排以形成經(jīng)重排的Vβ/Dβ/Jβ序列。

3.根據(jù)權(quán)利要求1和2中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述嚙齒動(dòng)物缺乏功能性內(nèi)源性嚙齒動(dòng)物TCRα和/或TCRβ可變基因基因座。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中所述缺乏功能性內(nèi)源性嚙齒動(dòng)物TCRα可變基因基因座包含選自以下組的缺失：(a)全部?jī)?nèi)源性Vα基因區(qū)段的缺失、(b)全部?jī)?nèi)源性Jα基因區(qū)段的缺失和(c)其組合，和/或所述缺乏功能性內(nèi)源性嚙齒動(dòng)物TCRβ可變基因座包含選自以下組的缺失：(a)全部?jī)?nèi)源性Vβ基因區(qū)段的缺失、(b)全部?jī)?nèi)源性Dβ基因區(qū)段的缺失、(c)全部?jī)?nèi)源性Jβ基因區(qū)段的缺失和(d)其組合。

5.根據(jù)權(quán)利要求1和2中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述未經(jīng)重排的人源Vα和Jα區(qū)段重排以形成經(jīng)重排的人源Vα/Jα序列，和/或所述未經(jīng)重排的人源Vβ、Dβ和Jβ區(qū)段重排以形成經(jīng)重排的人源Vβ/Dβ/Jβ序列。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述嚙齒動(dòng)物在T細(xì)胞表面表達(dá)包含人源TCRα和/或TCRβ可變區(qū)的T細(xì)胞受體。

7.根據(jù)權(quán)利要求1和2中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述嚙齒動(dòng)物包含CD4和CD8單陽性T細(xì)胞。

8.根據(jù)權(quán)利要求1和2中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述嚙齒動(dòng)物包含正常的脾臟CD3+T細(xì)胞與總脾臟細(xì)胞的比率。

9.根據(jù)權(quán)利要求1和2中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述嚙齒動(dòng)物包含中心和效應(yīng)記憶T細(xì)胞群。

10.根據(jù)權(quán)利要求1和2中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述未經(jīng)重排的TCRα可變基因基因座包含完整的人源Jα區(qū)段庫和完整的人源Vα區(qū)段庫，和/或所述未經(jīng)重排的TCRβ可變基因基因座包含完整的人源Jβ區(qū)段庫、完整的人源Dβ區(qū)段庫和完整的人源Vβ區(qū)段庫。

11.根據(jù)權(quán)利要求1和2中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述嚙齒動(dòng)物保留內(nèi)源性嚙齒動(dòng)物TCRα可變基因基因座和/或內(nèi)源性嚙齒動(dòng)物TCRβ可變基因基因座，并且其中所述內(nèi)源性嚙齒動(dòng)物TCRα可變基因基因座和/或所述內(nèi)源性嚙齒動(dòng)物TCRβ可變基因基因座是無功能的基因座。

12.根據(jù)權(quán)利要求1和2中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述嚙齒動(dòng)物是小鼠。

13.一種制備基因修飾的嚙齒動(dòng)物的方法，包含修飾所述嚙齒動(dòng)物基因組以包括：

未經(jīng)重排的T細(xì)胞受體(TCR)α可變基因基因座，其包含與內(nèi)源性嚙齒動(dòng)物TCRα恒定基因序列可操作地連接的至少一個(gè)人源Vα區(qū)段和至少一個(gè)人源Jα區(qū)段；以及，

未經(jīng)重排的TCRβ可變基因基因座，其包括與內(nèi)源性嚙齒動(dòng)物TCRβ恒定基因序列可操作地連接的至少一個(gè)未經(jīng)重排的人源Vβ區(qū)段、至少一個(gè)未經(jīng)重排的人源Dβ區(qū)段和至少一個(gè)未經(jīng)重排的人源Jβ區(qū)段。

14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中所述動(dòng)物在T細(xì)胞表面表達(dá)包含人源可變區(qū)和嚙齒動(dòng)物動(dòng)物恒定區(qū)的T細(xì)胞受體。

15.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中所述未經(jīng)重排的TCRα可變基因基因座包含61個(gè)未經(jīng)重排的人源Jα區(qū)段和8個(gè)未經(jīng)重排的人源Vα區(qū)段，并且其中所述未經(jīng)重排的TCRβ可變基因基因座包含14個(gè)未經(jīng)重排的人源Jβ區(qū)段、2個(gè)未經(jīng)重排的人源Dβ區(qū)段和14個(gè)未經(jīng)重排的人源Vβ區(qū)段。