[發明專利]修飾的腸激酶輕鏈有效
| 申請號： | 201280063896.7 | 申請日： | 2012-12-20 |
| 公開（公告）號： | CN103998606B | 公開（公告）日： | 2018-04-17 |
| 發明（設計）人： | H.F.維迪克;張旭家;劉云;佟崴嵬 | 申請（專利權）人： | 諾沃—諾迪斯克有限公司 |
| 主分類號： | C12N9/64 | 分類號： | C12N9/64;C12N15/62 |
| 代理公司： | 中國專利代理(香港)有限公司72001 | 代理人： | 杜艷玲,權陸軍 |
| 地址： | 丹麥*** | 國省代碼： | 暫無信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 修飾 腸激酶 | ||
1.一種牛腸激酶輕鏈類似物，其在第112、134、135位分別被替換為C112A、L134K和I135K，其中被突變的腸激酶輕鏈是SEQ ID NO:1。
2.使腸激酶輕鏈類似物在復性過程中溶解性提高的方法，包括將野生型牛腸激酶輕鏈的第112、134、135位分別突變為C112A、L134K和I135K的步驟，其中被突變的腸激酶輕鏈是SEQ ID NO:1。
3.生產牛腸激酶輕鏈類似物的方法，其中所述方法包括以下步驟：
a) 在包含誘導物的生長培養基中培養宿主細胞，其中所述宿主細胞包含編碼所述腸激酶輕鏈類似物的氨基酸序列的多核苷酸序列；
b) 回收具有包涵體形式的腸激酶輕鏈類似物的細胞；
c) 溶解并再折疊所述腸激酶輕鏈類似物；以及
d) 純化所述腸激酶輕鏈類似物，其中所述牛腸激酶輕鏈類似物是如權利要求1所述的類似物。
4.在細菌或酵母宿主細胞中重組產生肽或蛋白質的方法，包括
a) 在酵母或細菌中表達包含要產生的肽或蛋白質的融合蛋白；
b) 用根據權利要求1的牛腸激酶輕鏈類似物切割所述融合蛋白；以及
c) 分離產生的肽或蛋白質。
5.根據權利要求4所述的在細菌或酵母宿主細胞中重組產生肽或蛋白質的方法，其中步驟a)中表達的融合蛋白進一步包含Asp-Asp-Asp-Asp-Lys切割位點。
6.根據權利要求4或5所述的在細菌或酵母宿主細胞中重組產生肽或蛋白質的方法，其中所述宿主細胞是大腸桿菌。
7.根據權利要求4或5所述的在細菌或酵母宿主細胞中重組產生肽或蛋白質的方法，其中所述要產生的肽或蛋白質是GLP-1肽。
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