[發明專利]用于合成可拉酸、甘露糖基化和/或巖藻糖基化寡糖的突變微生物

有效

• 申請號: 201280061882.1
• 申請日: 2012-12-14
• 公開（公告）號: CN103987841A
• 公開（公告）日: 2014-08-13
• 發明（設計）人: 約里·博普雷;加斯帕德·勒丘;喬·梅爾滕斯
• 申請（專利權）人: 根特大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/21;C12P19/44;C12P19/00;C12P7/40;C12P17/06;C12P19/02;C12R1/19
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 鄭斌;彭鯤鵬

1.突變和/或轉化的微生物用于上調可拉酸操縱子的至少一種基因的用途，所述微生物包含導致轉錄調節因子需氧呼吸調控蛋白ArcA和異檸檬酸裂合酶調節因子IclR之修飾表達的遺傳改變，其中所述操縱子包含分別編碼磷酸甘露糖變位酶、甘露糖-1-磷酸鳥苷酸轉移酶、GDP-甘露糖4，6-脫水酶和GDP-巖藻糖合酶的基因cpsG、cpsB、gmd和fcl。

2.根據權利要求1所述的用途，其中所述上調可拉酸操縱子的至少一種基因在上調所述可拉酸操縱子的轉錄調節因子rcsA之后。

3.根據權利要求1或2所述的用途，其中所述微生物為大腸桿菌(Escherichia?coli)菌株，其中所述大腸桿菌菌株特別地為K12菌株，或其中所述K12菌株更特別地為大腸桿菌MG1655。

4.根據權利要求1至3所述的用途，其中所述遺傳改變，是破壞編碼ArcA和IclR的基因，是以人工啟動子替代編碼ArcA和IclR之基因的內源啟動子，或者是以人工核糖體結合位點替代內源核糖體結合位點。

5.根據權利要求1至4所述的用途，其中所述修飾表達是降低表達，或者其中所述降低表達特別地是取消表達。

6.根據權利要求1至5中任一項所述的用途，其中所述可拉酸操縱子的至少一種基因與在對應的野生型微生物中可拉酸操縱子的表達相比被上調6至8倍。

7.用于合成可拉酸和/或GDP-巖藻糖和/或巖藻糖基化寡糖的方法，其包括：遺傳地改變轉錄調節因子需氧呼吸調控蛋白ArcA和異檸檬酸裂合酶調節因子IclR以上調可拉酸操縱子的至少一種基因，其中所述操縱子包含基因cpsG、cpsB、gmd和fcl。

8.根據權利要求7所述的方法，其中根據權利要求1所述的突變與至少一種提高巖藻糖基化化合物之產生的突變組合應用。

9.根據權利要求8所述的方法，其中所述至少一種提高巖藻糖基化化合物之產生的突變選自：wcaJ基因的缺失；敲除可拉酸操縱子基因gmm、wcaA、wcaB、wcaC、wcaD、wcaE、wcaF、wcaI、wcaJ、wcaK、wcaL、wzx、wza、wzb、wzc和/或wcaM；敲除lacZ；引入蔗糖磷酸化酶或轉化酶；敲除基因pgi、pfkA和pfkB；敲除基因lon；引入巖藻糖基轉移酶和/或乳糖通透酶；或者其組合。

10.根據權利要求7所述的方法，其用于合成GDP-甘露糖和/或用于合成甘露糖基化寡糖。

11.根據權利要求10所述的方法，其中所述可拉酸操縱子的基因cpsG和cpsB被上調，并且其中

a)所述可拉酸操縱子的基因gmd被缺失，和/或，

b)其中所述基因gmm被缺失，和/或，

c)其中所述可拉酸操縱子基因fcl、gmd、gmm、wcaA、wcaB、wcaC、wcaD、wcaE、wcaF、wcaI、wcaJ、wcaK、wcaL、wzx、wza、wzb、wzc和/或wcaM被敲除，和/或，

d)其中編碼蔗糖磷酸化酶或轉化酶的基因被引入，和/或，

e)其中所述基因pgi、pfkA和pfkB被缺失，和/或，

f)敲除所述基因lon，和/或

g)其中編碼甘露糖基轉移酶的基因被引入。

12.突變和/或轉化的生物體，其中調節因子ArcA和IclR連同編碼酶磷酸葡萄糖異構酶和磷酸果糖激酶的基因被敲除，或者其功能被降低。

13.根據權利要求12所述的突變和/或轉化的生物體，其中所述酶磷酸葡萄糖異構酶由基因pgi編碼，并且其中所述酶磷酸果糖激酶由基因pfkA和/或pfkB編碼。

14.根據權利要求12或13所述的突變和/或轉化的生物體，其中所述生物體還以編碼蔗糖磷酸化酶或轉化酶的基因轉化。

15.根據權利要求12至14中任一項所述的突變和/或轉化的生物體，其中編碼乳糖通透酶之基因的活性提高。