[發明專利]三環硫代磷酸酯DNA

在審

• 申請號: 201280057688.6
• 申請日: 2012-10-12
• 公開（公告）號: CN104245935A
• 公開（公告）日: 2014-12-24
• 發明（設計）人: 克里斯蒂安·盧曼;路易斯·加西亞;托馬斯·沃伊特
• 申請（專利權）人: 肌肉學研究協會;伯爾尼大學;巴黎第六大學;法國國家衛生及研究醫學協會;法國國家科學研究中心
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/11;A61K31/712
• 代理公司: 中原信達知識產權代理有限責任公司 11219
• 代理人: 張穎;謝麗娜

本發明涉及含有由核苷間硫代磷酸酯鍵相連的三環核苷序列的核酸分子。本發明還涉及合成的反義寡核苷酸及其使用方法。

發明領域

本發明涉及含有由核苷間硫代磷酸酯鍵相連的三環核苷序列的核酸分子。本發明還涉及合成的反義寡核苷酸及其使用方法。

發明背景

三環DNA(tc-DNA)是一類受限DNA類似物，其中通過引入環丙烷環對每個核苷酸進行修飾，以限制骨架的構象柔性并優化扭轉角γ的骨架幾何學。同堿基的含有腺嘌呤和含有胸腺嘧啶的tc-DNA與互補的RNA形成格外穩定的A-T堿基對。

最近，本發明人提出將這類核酸的有利性質使用在反義寡核苷酸中，用于大量疾病的治療。國際申請號PCT/EP2010/054735公開了合成的反義寡核苷酸，以及使用反義寡核苷酸來改變pre-mRNA加工期間發生的剪接事件或下調含有重復序列例如3'或5'CUG、CAG和/或CCUG的突變的mRNA的表達的方法。更具體來說，已顯示，三環DNA反義寡核苷酸有效地促進pre-mRNA加工期間的外顯子跳躍，掩蔽pre-mRNA中的內含子沉默序列和/或莖-環序列，以及靶向RNase介導的mRNA的破壞。

杜氏肌營養不良(DMD)是最常見的遺傳性肌病，3,500名男性中約有1人患有此病，與種族無關。DMD的最主要后果是肌纖維變得特別脆，并且自然的肌肉活動就會激起肌肉組織的普遍損傷。肌萎縮蛋白的缺乏使肌纖維特別容易受到機械應力的攻擊，并經歷反復發作的壞死循環。結果，患者表現出骨骼肌的漸進性虛弱，所述骨骼肌隨著時間被脂肪纖維組織替換，導致在12歲左右喪失行走能力，隨后在十幾歲至三十幾歲之間由呼吸衰竭或心肌病導致過早死亡。此外，約三分之一的DMD患者還表現出認知缺損，表明神經元和腦功能的值得注意的破壞。DMD影響所有隨意肌，并在疾病的較晚階段涉及心肌和呼吸肌。因此，被執行用于治療或減輕DMD患者的癥狀的任何療法應該優選地靶向心臟和CNS。

尋找到一類新的化合物，其在與三環DNA寡核苷酸相比時具有提高的效率。本發明描述了三環硫代磷酸酯核苷酸的合成、性質和用途。

發明概述

本發明人已令人吃驚地顯示，包含三環硫代磷酸酯核苷酸的核酸分子除了它們與tc-DNA分子共有的在廣范圍的肌肉中有活性的能力之外，在穿透心臟組織中也高度有效，并且在心臟細胞中具有高活性。還已顯示，這樣的三環硫代磷酸酯核苷酸在系統遞送后能夠在CNS中挽救蛋白質、尤其是肌萎縮蛋白的表達。因此，本發明人顯示了包含三環硫代磷酸酯核苷酸的核酸分子跨過血腦屏障的出人意料的性質。

因此，本發明涉及包含通過核苷間硫代磷酸酯鍵(3'-OPS-O-5'鍵)相連的三環核苷的核酸分子。本發明的核酸分子在本公開中也被稱為“三環硫代磷酸酯DNA”或“tc-DNA-PS”。

本發明還涉及包含tc-DNA-PS和載體的組合物。具體來說，所述組合物可以是藥物組合物，其中所述載體是可藥用載體。本發明的組合物還可以任選地包含其他活性藥劑。

本發明還涉及用于合成tc-DNA-PS分子的方法。

本發明的核酸分子作為反義寡核苷酸(AON)特別有用，尤其是用于在肌肉和心臟細胞中或在CNS中獲得反義效果，尤其是在AON的系統遞送之后。因此，本發明還提供tc-DNA-PS AON。