[發(fā)明專利]用于對抗體的糖基化進行測定的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201280056607.0 | 申請日： | 2012-09-13 |
| 公開（公告）號： | CN103959063B | 公開（公告）日： | 2016-11-09 |
| 發(fā)明（設計）人： | 德爾菲娜·賈加;哈米德·莫克安娜;斯特凡娜·馬丁內(nèi)斯;米歇爾·芬克 | 申請（專利權）人： | CISBIO生物試驗公司 |
| 主分類號： | G01N33/542 | 分類號： | G01N33/542 |
| 代理公司： | 北京信慧永光知識產(chǎn)權代理有限責任公司 11290 | 代理人： | 洪俊梅;張淑珍 |
| 地址： | 法國*** | 國省代碼： | 法國;FR |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 用于 抗體 糖基化 進行 測定 方法 | ||
1.一種用于對抗體與存在于測量介質(zhì)中的細胞膜或完整細胞表達的Fc受體的結合進行測定的體外方法，所述方法包括如下步驟：
(i)用FRET伴侶對的第一成員對所述Fc受體進行直接或間接標記，或者向所述介質(zhì)中引入其Fc受體已預先被所述FRET伴侶對的第一成員直接標記的細胞膜或完整細胞；
(ii)向所述測量介質(zhì)中加入用所述FRET伴侶對的第二成員直接或間接標記的所述抗體；
(iii)對FRET信號進行測量，所述FRET信號的存在表示所述抗體與所述Fc受體的結合。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，用不同的抗體濃度重復所述方法；并且，所述方法包括對抗體-Fc受體鍵的解離常數(shù)進行測定的附加步驟(iv)。
3.一種通過與參比抗體進行競爭，對競爭性抗體與存在于測量介質(zhì)中的細胞膜或完整細胞表達的Fc受體的結合進行測定的體外方法，所述方法包括如下步驟：
(i)用FRET伴侶對的第一成員對所述Fc受體進行直接或間接標記，或者向所述介質(zhì)中引入其Fc受體已預先被所述FRET伴侶對的第一成員直接標記的細胞膜或完整細胞；
(ii)向所述測量介質(zhì)中加入所述競爭性抗體；
(iii)向所述測量介質(zhì)中加入用所述FRET伴侶對的第二成員直接或間接標記的所述參比抗體；
(iv)對FRET信號進行測量，與不存在所述競爭性抗體時測得的信號相比，在存在所述競爭性抗體的情況下測得的信號的降低表示所述競爭性抗體與所述Fc受體的結合。
4.如權利要求3所述的方法，其特征在于，用不同量的競爭性抗體重復步驟(ii)，步驟(iii)中加入的參比抗體的量是固定的；其特征還在于，所述方法包括對所述競爭性抗體的EC50進行測定并將其與所述參比抗體的EC50進行比較的附加步驟(v)。
5.如權利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述參比抗體和所述競爭性抗體在以下方面明顯不同：所述競爭性抗體由目的在于改變其Fc片段的糖基化水平的方法生產(chǎn)，或者經(jīng)過目的在于改變其Fc片段的糖基化水平的處理。
6.如權利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述參比抗體和測試抗體在以下方面明顯不同：所述測試抗體由目的在于改變其Fc片段的巖藻糖基化水平的方法生產(chǎn)，或經(jīng)過目的在于改變其Fc片段的巖藻糖基化水平的處理。
7.一種用于對抗體的糖基化水平進行測定的方法，所述方法包括如下步驟：
-實施如權利要求4所述的方法，在所述步驟(ii)中使用糖基化或去糖基化水平已知的數(shù)種競爭性抗體；然后
-實施如權利要求4所述的方法，在所述步驟(ii)中使用糖基化水平待測定的抗體；以及
-通過將測試抗體的EC50與所述糖基化或去糖基化水平已知的競爭性抗體的EC50相比較，測定所述測試抗體的糖基化水平。
8.一種用于對抗體的巖藻糖基化水平進行測定的方法，所述方法包括如下步驟：
-實施如權利要求4所述的方法，在所述步驟(ii)中使用數(shù)種巖藻糖基化或去巖藻糖基化水平已知的競爭性抗體；然后
-實施如權利要求4所述的方法，在所述步驟(ii)中使用巖藻糖基化或去巖藻糖基化水平待測定的抗體；以及
-通過將測試抗體的EC50與所述巖藻糖基化或去巖藻糖基化水平已知的競爭性抗體的EC50相比較，測定所述測試抗體的巖藻糖基化水平。
9.如在先權利要求中任一項所述的方法，其特征在于，所述Fc受體是γFc受體。
10.如在先權利要求中任一項所述的方法，其特征在于，所述Fc受體是CD16a受體或其變體。
11.如在先權利要求中任一項所述的方法，其特征在于，所述Fc受體經(jīng)由自殺酶直接進行標記，即，其特征在于，所述Fc受體以包含所述Fc受體和所述自殺酶的融合蛋白的形式表達；其特征還在于，通過向所述測量介質(zhì)中加入綴合有FRET伴侶之一的所述酶的底物實施標記。
12.如權利要求11所述的方法，其特征在于，所述自殺酶選自：O6-烷基鳥嘌呤DNA烷基轉(zhuǎn)移酶突變體、脫鹵素酶突變體或酰基載體蛋白片段。
13.如在先權利要求中任一項所述的方法，其特征在于，用完整細胞實施所述方法。
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