[發明專利]用于通用實時多重分析檢測的雙功能寡核苷酸探針

有效

• 申請號: 201280055550.2
• 申請日: 2012-11-12
• 公開（公告）號: CN103946397B
• 公開（公告）日: 2021-03-16
• 發明（設計）人: 京特·羅斯;貝恩德·法爾丁;費利克斯·馮施特滕;西蒙·瓦德勒
• 申請（專利權）人: 阿爾貝特-路德維希斯弗賴堡大學
• 主分類號: C12Q1/6818
• 分類號: C12Q1/6818;C12Q1/6823;C12Q1/6876
• 代理公司: 北京銀龍知識產權代理有限公司 11243
• 代理人: 金鮮英;張默

1.一種用于檢測至少一種靶分子的用于非診斷目的的方法，包括一種系統，所述系統包括介質探針和檢測分子，所述介質探針用于檢測至少一種靶分子且包括探針區域和介質區域，其特征在于，所述介質探針是寡核苷酸，所述探針區域位于所述寡核苷酸的3’-末端，并且所述介質區域位于所述寡核苷酸的5’-末端，其中在所述區域之間存在化學、生物和/或物理裂解位點，并且所述探針區域具有對于模板分子的親和性，而所述介質區域具有另外的對于檢測分子的親和性，并且其中在所述模板分子的擴增過程期間所述介質探針在所述裂解位點裂解，并且裂解的介質區域與所述檢測分子的相互作用觸發可檢測信號，

所述檢測分子的特征在于，所述檢測分子是寡核苷酸且具有至少下述區域：

a.位于所述檢測分子的5’-末端的第一區域，其具有熒光受體和熒光供體中的一個，

b.第二區域，其與所述介質區域相互作用，和

c.第三區域，其具有熒光供體和熒光受體中的另一個，

所述方法包括下述步驟：

I.將所述介質探針的探針區域結合至所述模板分子和/或所述靶分子的序列；

II.借助輔助分子擴增所述模板分子和/或所述靶分子；

III.在步驟II期間利用所述輔助分子使所述介質探針在所述裂解位點裂解，其中所述輔助分子是帶有5’核酸酶活性的聚合酶；以及

IV.將所述介質探針的裂解的介質區域結合至所述檢測分子，其中所述介質區域的3’-末端結合至所述第二區域，

V.通過聚合酶將結合至所述檢測分子的第二區域的所述介質區域進行酶促延長，其中所述聚合酶結合至結合后的介質區域的3’-末端。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，使所述介質探針斷裂掉誘導所述介質探針的至少一個區域的物理和/或化學性質的變化，所述物理和/或化學性質選自以下性質的組：分子量；酶活性；親和性或親合力；化學反應性；化學基團的存在；導電性、極性或電荷；和/或光吸收和光發射。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述介質區域結合至所述檢測分子的所述第二區域。

4.根據權利要求1至3中任一項所述的方法，其特征在于，所述輔助分子選自下列分子的組：催化劑、天然物質、細胞裂解物、細胞成分和/或合成分子。

5.根據權利要求1至3中任一項所述的方法，其特征在于，所述輔助分子選自下列分子的組：蛋白質和/或核酸。

6.根據權利要求1至3中任一項所述的方法，其特征在于，所述輔助分子為酶。

7.根據權利要求1至3中任一項所述的方法，其特征在于，所述輔助分子為酶體系。

8.根據權利要求1至3中任一項所述的方法，其特征在于，所述輔助分子是來自核酸擴增系統和/或限制酶系統的分子。

9.根據權利要求1至3中任一項所述的方法，其特征在于，所述模板分子和/或所述靶分子的擴增是通過PCR來完成。

10.根據權利要求1至3中任一項所述的方法，其特征在于，所述模板分子和/或所述靶分子的擴增是通過實時PCR來完成。

11.根據權利要求1至3中任一項所述的方法，其特征在于，所述檢測分子由于與所述介質區域發生直接或間接的相互作用從而被修飾，所述修飾選自二級結構的變化；熒光性、磷光性、質量、吸收性、光散射、導電性、酶活性和/或親和性的變化。

12.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，由于所述介質區域與所述檢測分子的第二區域的直接或間接的相互作用，所述檢測分子中發生物理或化學上可測量的變化。

13.根據權利要求1至3中任一項所述的方法，其特征在于，序列特異性或非序列特異性熒光探針和/或顯色探針或熒光染料與所述介質探針和/或所述檢測分子的至少一個區域相互作用。