[發(fā)明專利]顯示出縮短的生物學(xué)活性的神經(jīng)毒素

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201280055116.4
• 申請(qǐng)日: 2012-11-08
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103974973A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-08-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: M·施密特;J·弗雷韋特;F·霍夫曼;G·格勒爾
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 莫茨制藥有限及兩合公司
• 主分類號(hào): C07K14/47
• 分類號(hào): C07K14/47;C07K14/435;C07K14/33;C12N5/00;A61K38/00
• 代理公司: 北京市中咨律師事務(wù)所 11247
• 代理人: 黃革生;林柏楠

本發(fā)明涉及制藥領(lǐng)域。具體地，其考慮編碼神經(jīng)毒素多肽的多核苷酸，所述多肽在對(duì)象中顯示出生物學(xué)效應(yīng)的減少的持續(xù)時(shí)間，其中所述多肽在輕鏈中包含至少一個(gè)E3連接酶識(shí)別基序，其中所述E3連接酶識(shí)別基序優(yōu)選地是E3連接酶MDM2的結(jié)合基序。本發(fā)明還涉及由本發(fā)明的多核苷酸編碼的多肽以及包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸替換的多肽。本發(fā)明還涵蓋包含所述多核苷酸的載體和宿主細(xì)胞，由此編碼的多肽，和特異性地與所述多肽結(jié)合的抗體。此外，本發(fā)明涉及包含所述多核苷酸和多肽的藥物以及該藥物特定的治療應(yīng)用。此外，本發(fā)明考慮用于所述多肽和藥物生產(chǎn)的方法。

肉毒桿菌和破傷風(fēng)梭菌產(chǎn)生高效的神經(jīng)毒素，即分別為肉毒毒素(BoNT)和破傷風(fēng)毒素(TeNT)。這些梭菌神經(jīng)毒素(CNT)與神經(jīng)元細(xì)胞特異性地結(jié)合并且干擾神經(jīng)遞質(zhì)釋放。每種毒素被合成為無(wú)活性的未加工的約150kDa的單鏈蛋白。翻譯后加工涉及二硫橋的形成和細(xì)菌蛋白酶的有限蛋白酶解(切割)。活性的神經(jīng)毒素由兩條鏈組成，它們是通過(guò)二硫鍵連接的約50kDa的N端輕鏈和約100kDa的重鏈。CNT由三個(gè)結(jié)構(gòu)域組成，即催化輕鏈，涵蓋易位結(jié)構(gòu)域(N端的一半)和受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域(C端的一半)的重鏈，見(jiàn)Krieglstein1990,Eur J Biochem188,39；Krieglstein1991,Eur J Biochem202,41；Krieglstein1994,J Protein Chem13,49。肉毒神經(jīng)毒素以分子復(fù)合體形式合成，其包含150kDa的神經(jīng)毒素蛋白和相關(guān)的無(wú)毒性的復(fù)合蛋白。基于梭菌菌株和不同的神經(jīng)毒素血清型，復(fù)合體的大小在300kDa至900kDa的范圍內(nèi)變化。在這些復(fù)合體中的復(fù)合蛋白穩(wěn)定神經(jīng)毒素并且保護(hù)其免于降解，見(jiàn)Chen1998,Infect Immun66(6):2420-2425。

肉毒桿菌分泌七種抗原性不同的血清型，其被稱作肉毒神經(jīng)毒素(BoNT)的A至G型。全部血清型和破傷風(fēng)梭菌分泌的相關(guān)破傷風(fēng)神經(jīng)毒素(TeNT)是Zn²⁺內(nèi)切蛋白酶，所述Zn²⁺內(nèi)切蛋白酶通過(guò)切割SNARE蛋白封閉突觸的胞吐作用，見(jiàn)Couesnon,2006,Microbiology,152,759。BoNT在肉毒中毒中引起可見(jiàn)的弛緩性肌肉麻痹，見(jiàn)Fischer2007,PNAS104,10447。

盡管它具有毒性作用，肉毒毒素已經(jīng)用于很多疾病或病癥的治療劑。在1989年肉毒毒素血清型A在美國(guó)被批準(zhǔn)用于人的斜視、瞼痙攣和其他的病癥的治療。它可作為具有復(fù)合的蛋白質(zhì)的肉毒毒素A神經(jīng)毒素通過(guò)商業(yè)途徑得到，例如以商品名BOTOX(Allergan Inc)或者商品名DYSPORT(Ipsen Ltd.)獲得。改進(jìn)的沒(méi)有復(fù)合體的神經(jīng)毒素A多肽制劑以商品名XEOMIN(Merz Pharmaceuticals LLC)獲得。肉毒毒素的效應(yīng)只是暫時(shí)的，這是需要肉毒毒素的重復(fù)施用以維持治療效果的原因。

梭菌神經(jīng)毒素減弱隨意肌強(qiáng)度并且是斜視、包括頸肌張力障礙的灶性張力障礙，以及良性特發(fā)性瞼痙攣的有效的治療劑。已經(jīng)進(jìn)一步地顯示梭菌神經(jīng)毒素減輕單側(cè)面部痙攣和局限性痙攣，并且，此外，其對(duì)多種其他的適應(yīng)癥如胃腸病癥、多汗以及美容除皺是有效的，見(jiàn)Jost2007,Drugs67,669。

然而，對(duì)于醫(yī)學(xué)病況或疾病如傷口愈合、骨的固定和腱斷裂治療、外科手術(shù)后固定，特別用于痔切除術(shù)、牙植入物的引入或者髖關(guān)節(jié)置換術(shù)(內(nèi)假體)、膝關(guān)節(jié)成形術(shù)、眼科手術(shù)、痤瘡、易激腸疾病、陰道痙攣、下背痛、或良性前列腺增生，減弱肌肉強(qiáng)度和收縮也是所希望的。神經(jīng)毒素通常在一段時(shí)間內(nèi)顯示它們的生物學(xué)效應(yīng)，所述一段時(shí)間比所述疾病或病況的有效治療實(shí)際需要的時(shí)間長(zhǎng)。然而，在所述醫(yī)學(xué)病況或疾病的治療中延長(zhǎng)的肌肉麻痹是有害的或者至少不是優(yōu)選的。然而，只在所希望的時(shí)間段內(nèi)顯示它們的生物學(xué)效應(yīng)的神經(jīng)毒素還不能得到。

因此，本發(fā)明的技術(shù)問(wèn)題可以看作是提供滿足前述需要的工具和方法。通過(guò)權(quán)利要求和下文表征的實(shí)施方案解決了該技術(shù)問(wèn)題。