[發明專利]制備用于藥物遞送的脂質納米顆粒的方法

有效

• 申請號: 201280054027.8
• 申請日: 2012-11-02
• 公開（公告）號: CN103906504B
• 公開（公告）日: 2017-11-17
• 發明（設計）人: V·克諾波夫;R·P·維特;P·卡爾瑪里;R·李;D·韋布;V·阿科皮揚
• 申請（專利權）人: 日東電工株式會社
• 主分類號: A61K9/127
• 分類號: A61K9/127;C12N15/113
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司72002
• 代理人: 過曉東

1.一種制備包裹雙鏈RNA分子的脂質納米顆粒的方法，所述方法包括以下步驟：

制備脂質溶液，其包含溶于乙醇中的陽離子脂質、DOPE、甾醇和PEG脂質；

制備第一水溶液，其包含0.08-0.8mg/ml的所述RNA分子和pH 4-6的水性緩沖液；

以恒定速率在1-100分鐘內，通過浸入注射將所述脂質溶液通過管泵入容器中包含的水溶液，從而所述脂質溶液與所述水溶液混合以制備包含25-45％v:v有機溶劑和脂質納米顆粒的混合物，所述脂質納米顆粒具有0.06-0.16w:w的RNA:脂質比例以及2.5:1-1:1的RNA:脂質電荷比例，在添加所述脂質溶液的同時，通過攪拌、振蕩或再循環來混合所述容器中所得的混合物；以及

相對于pH 6-8的第二水性緩沖溶液進行滲濾，由此從所述混合物去除所述有機溶劑。

2.權利要求1的方法，其中所述第一水溶液還包含多糖。

3.權利要求2的方法，其中所述多糖選自蔗糖、海藻糖、乳糖、麥芽糖和菊粉。

4.權利要求1的方法，其還包括冷凍干燥所述包裹RNA分子的脂質納米顆粒的步驟。

5.權利要求1的方法，其中所述陽離子脂質為所述脂質的40-60摩爾％。

6.權利要求1的方法，其中所述陽離子脂質選自HEDC、HEDODC和HE-Et-DODC：

7.權利要求1的方法，其中所述陽離子脂質由可電離或不可電離的正電荷組成。

8.權利要求1的方法，其中所述脂質還包含一種含類視黃醇分子的化合物。

9.權利要求1的方法，其中所述脂質溶液和所述第一水溶液處于25-55℃。

10.權利要求1的方法，其中所述第一水溶液包含檸檬酸鹽。

11.一種藥物制劑，其包含通過權利要求1-10中任一項的方法制備的包裹雙鏈RNA分子的脂質納米顆粒，其中所述陽離子脂質由結構式I組成：

其中

Z為烷基接頭，C₂-C₄烷基；

Y為烷基接頭，C₁-C₆烷基；

R₁和R₂互相獨立地為C₁₂-C₃₀烷基或C₁₂-C₃₀烯基；

R₃和R₄互相獨立地為氫、C₁-C₆烷基或-CH₂CH₂OH；

n為1-6；

X為反荷離子；并且

其中所述藥物制劑包含多糖。

12.權利要求11的藥物制劑，其中所述陽離子脂質為所述脂質的40-60摩爾％。

13.權利要求11的藥物制劑，其中所述陽離子脂質選自HEDC、HEDODC和HE-Et-DODC：

14.權利要求11的藥物制劑，其中所述陽離子脂質由可電離或不可電離的正電荷組成。

15.權利要求11的藥物制劑，其中所述脂質還包含一種含類視黃醇分子的化合物。

16.權利要求11的藥物制劑，其中所述方法還包括冷凍干燥所述脂質納米顆粒包裹的RNA分子。

17.權利要求11的藥物制劑，其中所述多糖選自蔗糖、海藻糖、乳糖、麥芽糖和菊粉。

18.權利要求11的藥物制劑，其中所述包裹RNA分子的脂質納米顆粒的體積加權的平均粒徑為50-100nm。

19.權利要求11-18中任一項的藥物制劑，其中所述包裹RNA分子的脂質納米顆粒具有小于0.2的多分散性指數。

20.一種用于制備包裹雙鏈RNA分子的脂質納米顆粒的試劑盒，其中所述包裹雙鏈RNA分子的脂質納米顆粒是通過權利要求1-10中任一項的方法制備的，所述試劑盒包含溶于乙醇中的陽離子脂質、DOPE、甾醇和PEG脂質，其中所述陽離子脂質由結構式I組成：

其中

Z為烷基接頭，C₂-C₄烷基；

Y為烷基接頭，C₁-C₆烷基；

R₁和R₂互相獨立地為C₁₂-C₃₀烷基或C₁₂-C₃₀烯基；

R₃和R₄互相獨立地為氫、C₁-C₆烷基或-CH₂CH₂OH；

n為1-6；且

X為反荷離子；并且

其中所述方法還包括冷凍干燥所述脂質納米顆粒包裹的RNA分子。