[發明專利]用突變體BaEV糖蛋白假型化的慢病毒載體

有效

• 申請號: 201280053749.1
• 申請日: 2012-09-28
• 公開（公告）號: CN104080917B
• 公開（公告）日: 2016-11-02
• 發明（設計）人: 阿奈·吉拉爾-加涅潘;埃爾莎·費爾赫芬;迪米特里·拉維爾特;弗朗西斯-盧瓦克·科塞
• 申請（專利權）人: 國家健康與醫學研究院;里昂高等師范學院
• 主分類號: C12N15/867
• 分類號: C12N15/867;C07K14/15;A61K48/00
• 代理公司: 北京市金杜律師事務所 11256
• 代理人: 孟凡宏;謝燕軍

1.用于將生物材料轉移到細胞中的假型化病毒載體顆粒，其中所述載體顆粒至少包含：

-嵌合包膜糖蛋白，其包含或由狒狒內源性逆轉錄病毒(BaEV)包膜糖蛋白的跨膜和胞外結構域與鼠白血病病毒(MLV)包膜糖蛋白的胞質尾結構域的融合體組成；或

-修飾的BaEV包膜糖蛋白，其中胞質尾結構域缺乏融合抑制性R肽。

2.根據權利要求1所述的假型化病毒載體顆粒，其中所述病毒載體顆粒是慢病毒載體顆粒。

3.根據權利要求2所述的假型化病毒載體顆粒，其中所述慢病毒載體顆粒選自HIV和SIV。

4.根據權利要求1-3任一項所述的假型化病毒載體顆粒，其中所述生物材料是一種或多種核酸。

5.根據權利要求1-4任一項所述的假型化病毒載體顆粒，其中所述病毒載體顆粒進一步顯示至少一種選自干細胞因子(SCF)、血小板生成素(TPO)、IL-2、IL-15和IL-7的細胞因子。

6.根據權利要求1-5任一項所述的假型化病毒載體顆粒，其中所述假型化病毒載體顆粒意欲用于將生物材料轉移入造血細胞。

7.根據權利要求1-6任一項所述的假型化病毒載體顆粒，其用于治療造血功能障礙或自身免疫性疾病。

8.根據權利要求7所述的假型化病毒載體顆粒的用途，其中所述造血功能障礙選自范可尼貧血、血友病、β-地中海貧血、Wiskott-Aldrich綜合征、X-連鎖重癥聯合免疫缺陷、腺苷脫氨酶缺乏癥、慢性肉芽腫病和腎上腺腦白質營養不良。

9.用于產生假型化病毒載體顆粒的方法，其包括

a)用以下物質轉染細胞以得到生產細胞：

(i)至少一種第一核酸序列，包含具有包裝能力的逆轉錄病毒衍生的基因組；

(ii)至少一種第二核酸序列，包含編碼來自所述逆轉錄病毒的核心蛋白的cDNA，和

(iii)至少一種第三核酸序列，包含編碼以下的cDNA：

-嵌合包膜糖蛋白，包含或由狒狒內源性逆轉錄病毒(BaEV)包膜糖蛋白的跨膜和胞外結構域與鼠白血病病毒(MLV)包膜糖蛋白的胞質尾結構域的融合體組成，如上所定義；或

-修飾的BaEV包膜糖蛋白，其中胞質尾結構域缺乏融合抑制性R肽，如上所定義；

b)將所述生產細胞在培養物中維持足夠時間，以允許表達cDNA以產生編碼蛋白；和

c)允許編碼蛋白形成假型化病毒載體顆粒。

10.藥物，其包含作為活性成分的如權利要求1-5任一項中定義的假型化病毒載體顆粒。

11.如權利要求1-5任一項中定義的假型化病毒載體顆粒用于將生物材料離體轉移到造血細胞中的用途。

12.用于轉導造血細胞的方法，其包括在實現通過所述假型化病毒載體顆粒轉導所述造血細胞的條件下將所述造血細胞與如權利要求1-5任一項中定義的假型化病毒載體顆粒接觸。

13.根據權利要求12所述的方法，其中所述造血細胞選自造血干細胞、CD34⁺祖細胞、非常早期CD34⁺祖細胞、B細胞CD19⁺祖細胞、髓樣CD13⁺祖細胞、T淋巴細胞、B淋巴細胞、單核細胞、樹突狀細胞、外周血CD34⁺細胞、癌B細胞(BCLL)、邊緣區淋巴瘤(MZL)B細胞和胸腺細胞。

14.根據權利要求13所述的方法，其中所述造血細胞不用至少一種細胞因子預刺激。

15.穩定的病毒包裝細胞系，其產生如權利要求1-5任一項中定義的假型化病毒載體顆粒。