[發明專利]核酸擴增方法、核酸基板、核酸分析方法及核酸分析裝置

在審

• 申請號: 201280052238.8
• 申請日: 2012-10-19
• 公開（公告）號: CN103890161A
• 公開（公告）日: 2014-06-25
• 發明（設計）人: 齋藤俊郎;杉村禎昭
• 申請（專利權）人: 株式會社日立高新技術
• 主分類號: C12M1/00
• 分類號: C12M1/00;C12Q1/68;C12N15/09
• 代理公司: 北京銀龍知識產權代理有限公司 11243
• 代理人: 鐘晶;於毓楨

1.一種核酸擴增方法，其特征在于，包含如下工序：在基體的表面配置固定有第一核酸的區域和未固定所述第一核酸的區域的工序；將同一鏈上具有至少兩個以上作為解析對象的堿基序列的第二核酸固定在固定有所述第一核酸的區域上的工序；以及進行所述第二核酸的擴增反應的工序。

2.一種核酸擴增方法，其特征在于，包含如下工序：在基體的表面配置固定有第一核酸的區域和未固定所述第一核酸的區域的工序；將同一鏈上具有至少兩個以上作為解析對象的堿基序列的第二核酸固定在固定有所述第一核酸的區域上的工序；以及供給第三核酸并以所述第一核酸及第三核酸為引物進行所述第二核酸的擴增反應的工序。

3.根據權利要求1所述的核酸擴增方法，其特征在于，第二核酸的直徑的平均值大于固定有第一核酸的區域的直徑的平均值的1/2。

4.根據權利要求1所述的核酸擴增方法，其特征在于，第二核酸為單鏈，且具有自退火結構。

5.根據權利要求1所述的核酸擴增方法，其特征在于，包含在擴增反應后去除第一核酸的延伸反應產物的互補鏈的工序。

6.根據權利要求1所述的核酸擴增方法，其特征在于，第二核酸是以具有解析對象堿基序列的環狀核酸為模板，在具有鏈置換活性的聚合酶作用下獲得的鏈置換延伸反應產物。

7.根據權利要求1所述的核酸擴增方法，其特征在于，所述擴增反應為恒溫反應。

8.根據權利要求1所述的核酸擴增方法，其特征在于，固定有所述第一核酸的區域的直徑的平均值為500nm以下，且各固定區域中所述第一核酸的分子數的平均值為10,000分子以上。

9.根據權利要求1所述的核酸擴增方法，其特征在于，固定有所述第一核酸的各個區域中，所述第一核酸的固定密度為10,000分子/μm²以上。

10.根據權利要求9所述的核酸擴增方法，其特征在于，所述固定密度為100,000分子/μm²以上。

11.根據權利要求1所述的核酸擴增方法，其特征在于，所述擴增反應的反應溫度為50℃～70℃之間的溫度。

12.根據權利要求1所述的核酸擴增方法，其特征在于，所述第二核酸是采用滾環擴增(RCA)反應合成的大體積核酸。

13.一種核酸分析方法，其特征在于，具有在進行權利要求1～12中任一項所述的核酸擴增方法之后，進行導入帶熒光標記堿基的延伸反應的單元和對所述熒光標記進行熒光檢測的單元。

14.一種核酸基板，在基體上固定有包含作為解析對象的堿基序列的核酸，其特征在于，固定有所述核酸的區域的直徑的平均值為500nm以下，且所述核酸的固定區域中的核酸的分子數的平均值為10,000分子以上。

15.一種核酸基板，其具有至少一個以上的流路，用于進行權利要求1所述的核酸擴增方法。

16.一種核酸分析裝置，其具有至少一個溫度調節裝置和送液機構，用于進行權利要求1所述的核酸擴增方法。