[發明專利]犬源化腫瘤壞死因子抗體及其使用方法

無效

• 申請號: 201280052125.8
• 申請日: 2012-08-29
• 公開（公告）號: CN103958545A
• 公開（公告）日: 2014-07-30
• 發明（設計）人: 大衛·吉爾芮
• 申請（專利權）人: NVIP私人有限公司
• 主分類號: C07K16/24
• 分類號: C07K16/24;C12N15/13;A61P37/06;A61K39/395
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛;劉成春

1.犬源化抗體或其抗原結合片段，其特異性結合犬腫瘤壞死因子。

2.如權利要求1所述的犬源化抗體或其抗原結合片段，其中通過以下方法制備所述抗體，所述方法包括下列步驟：

提供來自犬之外的物種的供體抗體，其中所述供體抗體對腫瘤壞死因子具有結合特異性；

將所述供體抗體框架區氨基酸序列的每一氨基酸殘基與存在于一個或多個犬抗體框架區氨基酸序列中對應位置的每一氨基酸殘基進行比較，以鑒別出所述供體抗體框架區的氨基酸序列內與所述一個或多個犬抗體框架區的氨基酸序列內對應位置的一個或多個氨基酸殘基不同的一個或多個氨基酸殘基；以及

用所述一個或多個犬抗體中對應位置存在的一個或多個氨基酸殘基取代所述供體抗體中的一個或多個鑒別出的氨基酸殘基。

3.如權利要求2所述的抗體或其抗原結合片段，其中取代所述一個或多個鑒別出的氨基酸殘基的步驟包括：用所述對應位置存在的與一個或多個被取代的氨基酸殘基具有最高同源性的一個或多個氨基酸殘基取代所述一個或多個鑒別出的氨基酸殘基。

4.如權利要求2或3所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述方法進一步包括下述步驟：用犬抗體的重鏈和/或輕鏈恒定結構域取代所述供體抗體的重鏈和/或輕鏈恒定結構域。

5.如權利要求1-4中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含輕鏈可變區和/或重鏈可變區，所述輕鏈可變區包含氨基酸序列SEQ?ID?NO:1或者與所述氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列，所述重鏈可變區包含氨基酸序列SEQ?ID?NO:2或者與所述氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列。

6.如權利要求5所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體包含輕鏈和/或重鏈，所述輕鏈包含氨基酸序列SEQ?ID?NO:3或者與所述氨基酸序列具有至少85％同一性的氨基酸序列，所述重鏈包含選自SEQ?ID?NO:4、SEQ?ID?NO:5、SEQ?ID?NO:6和SEQ?ID?NO:7的氨基酸序列，或與所述氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。

7.如權利要求1-5中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體包含重鏈，所述重鏈包含選自SEQ?ID?NO:4、非糖基化SEQ?ID?NO:4、非糖基化SEQ?ID?NO:5、非糖基化SEQ?ID?NO:6、非糖基化SEQ?ID?NO:7和SEQ?ID?NO:7的氨基酸序列，或與所述氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。

8.如權利要求1-5中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體包含重鏈，所述重鏈包含選自SEQ?ID?NO:5和SEQ?ID?NO:6的氨基酸序列，或與所述氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。

9.如權利要求1-4中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含輕鏈可變區和/或重鏈可變區，其中所述輕鏈可變區包含以下中的至少一個：

由氨基酸序列SEQ?ID?NO:10組成或包含所述氨基酸序列的FR1框架區；

由氨基酸序列SEQ?ID?NO:11組成或包含所述氨基酸序列的FR2框架區；

由氨基酸序列SEQ?ID?NO:12組成或包含所述氨基酸序列的FR3框架區；以及

由氨基酸序列SEQ?ID?NO:13組成或包含所述氨基酸序列的FR4框架區；

所述重鏈可變區包含以下中的至少一個：

由氨基酸序列SEQ?ID?NO:14組成或包含所述氨基酸序列的FR1框架區；

由氨基酸序列SEQ?ID?NO:15組成或包含所述氨基酸序列的FR2框架區；

由氨基酸序列SEQ?ID?NO:16組成或包含所述氨基酸序列的FR3框架區；以及

由氨基酸序列SEQ?ID?NO:17組成或包含所述氨基酸序列的FR4框架區。

10.如權利要求9所述的抗體或其抗原結合片段，其包含具有SEQ?ID?NO:10的FR1區的輕鏈可變結構域，所述FR1區已通過選自以下的一個或多個氨基酸取代得以修飾：位置5(T5)的氨基酸殘基T被氨基酸殘基M或I取代，S7是T，Α9是L或P，S12是Α，L13是V，S14是T或R，Q15是P或R，E16是D，K18是E、Α、P、T或L，V19是Α，T20是S，T22是S或Y，以及C23是Y。