[發明專利]用于提高A型鏈球菌免疫測定法的特異性的N-乙酰基-D-葡糖胺

有效

• 申請號: 201280048811.8
• 申請日: 2012-07-31
• 公開（公告）號: CN103975241A
• 公開（公告）日: 2014-08-06
• 發明（設計）人: P.Y.任;J.麥克盧爾;K.S.理查森
• 申請（專利權）人: 奎德爾公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/558;G01N33/569
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 林毅斌;萬雪松

相關申請的交叉引用

本申請要求2011年8月3日提交的美國專利申請61/514,790的權益，其通過引用結合到本文中。

技術領域

本公開內容總的來說涉及診斷學的領域，具體地說涉及用于檢測生物樣品中的分析物的裝置、方法和試劑盒。更具體地說，本公開內容提供其中通過添加N-乙酰基-D-葡糖胺提高檢測A型鏈球菌的特異性的免疫測定法。

發明背景

釀膿鏈球菌(Streptococcus pyogenes) (A型鏈球菌)是一種以細胞鏈或細胞對存在的非運動性的、不產生孢子的革蘭氏陽性細菌，其中各個細胞是圓形到卵形的球菌，直徑為0.6-1.0微米。A型鏈球菌的細胞表面結構由N-乙酰葡糖胺和N-乙酰胞壁酸的重復單位組成，是標準的肽聚糖。在歷史上，鏈球菌的決定性標識在于最初由Rebecca Lancefield描述的“細胞壁”多糖抗原的血清學反應性。確定了18種類型特異性抗原(Lancefield類型)。A型莢膜多糖(亦稱“C物質”或“碳水化合物抗原型”)是N-乙酰葡糖胺和鼠李糖的聚合物。一些類型的抗原為一種以上菌種共有。(K. Todar, Online Textbook of Bacteriology；參見textbookofbacteriology.net)。

釀膿鏈球菌是人類最常見的病原體之一。大約5-15%的正常個體通常在呼吸道中帶有該細菌，但保持無癥狀。作為正常菌群，釀膿鏈球菌可以在以下情況下感染：當防御受損或當該生物能夠滲透固有防御時。當細菌被引入或傳播到易感組織時，便會發生各種類型的化膿性感染。

與釀膿鏈球菌有關的急性疾病主要發生在呼吸道、血流或皮膚中。鏈球菌性疾病最通常為呼吸道感染(咽炎或扁桃體炎)或皮膚感染(膿皮病)。急性釀膿鏈球菌感染可作為咽炎(膿毒性咽喉炎)、猩紅熱(皮疹)、膿皰病(皮膚淺層感染)或蜂窩織炎(皮膚深層感染)呈現。侵入性產毒感染可導致壞死性筋膜炎、關節或骨感染、肌炎、腦膜炎、心內膜炎和鏈球菌中毒性休克綜合征。在由釀膿鏈球菌引起急性感染后，患者還可能發生免疫介導性鏈球菌后后遺癥，例如急性風濕熱和急性腎小球性腎炎，這發生在1-3%的未治療感染中。這些病況及其病理學不歸因于細菌的傳播，而歸于對A型鏈球菌抗原的免疫反應異常。

由于青霉素在A型鏈球菌性疾病的治療中是有效的，因此大多數感染只意味著伴隨有皮疹的咽炎。然而，由于快速進展性疾病的偶發病例和由于未治療感染中嚴重后遺癥的小風險，釀膿鏈球菌仍然是主要的健康顧慮，并且正在努力以闡明這些后遺癥的風險和機制以及鑒定鏈球菌的致風濕病菌株和致腎炎菌株。

釀膿鏈球菌的細胞表面構成許多細菌毒力的決定因素，尤其涉及定居和逃避吞噬作用和宿主免疫應答的那些。細菌的表面極為復雜并且在化學上是多種多樣的。抗原組分包括莢膜多糖(C物質)、細胞壁肽聚糖和脂膜酸(LTA)和各種表面蛋白，包括M蛋白、菌毛蛋白、纖連蛋白結合蛋白(例如蛋白質F)和結合細胞的鏈激酶。

釀膿鏈球菌的細胞質膜含有一些抗原，其類似于人心臟、骨骼和平滑肌、心臟瓣膜成纖維細胞和神經元組織的抗原。已提出病原體和宿主間的分子模擬為發生自身免疫病的機制。由于微生物含有與宿主蛋白質類似的蛋白質，因此宿主免疫應答可被抑制或能耐受感染。相反地，宿主B細胞和T細胞被分子模擬的刺激可引起宿主免疫系統開始對自身蛋白產生應答，就好像他們是外來的。

正如在其它自身免疫病中一樣，環境和遺傳因子兩者參與風濕性心臟炎和炎性心臟病的發生，且A型鏈球菌和心臟組織間的分子模擬似乎起作用。針對A型鏈球菌抗原的B細胞和T細胞反應的研究已得到一些有關在A型鏈球菌感染后風濕性心臟炎發病機制的幾個步驟的信息。早期步驟包括針對A型鏈球菌碳水化合物抗原N-乙酰葡糖胺和心臟肌球蛋白的交叉反應性自身抗體的發生。這些抗體然后與心瓣內皮反應，心瓣內皮變得發炎，具有血管細胞粘附分子-1 (VCAM-1)表達。T細胞CD4+和CD8+，然后通過內皮/心內膜浸潤進入瓣(一種血管結構)。可在心內膜下形成含有巨噬細胞和T細胞的Aschoff小體或肉芽腫病變。T細胞對鏈球菌M蛋白抗原序列起反應。瓣出現瘢痕，在瓣中最終具有新血管形成和進行性慢性疾病。在宿主中，模擬抗原心臟肌球蛋白和層粘連蛋白已分別包括在心肌和瓣中。(Cunningham, Front. Biosci., 2003, 8:s533-43)。