[發(fā)明專利]用于降解有機(jī)磷酸酯的酶

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201280045762.2
• 申請日: 2012-07-20
• 公開（公告）號: CN103814127B
• 公開（公告）日: 2017-02-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: C·斯科特;J·奧克肖特;R·拉塞爾;N·弗倫克;S·科措尼斯;劉凱燕
• 申請（專利權(quán)）人: 聯(lián)邦科學(xué)工業(yè)研究組織
• 主分類號: C12N9/14
• 分類號: C12N9/14;C07K14/195;C12N15/55;A61K38/46;C07K19/00;C07K17/00;C12N15/29;B09C1/10;C12Q1/34
• 代理公司: 北京戈程知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司11314
• 代理人: 程偉

1.一種多肽，其含有序列如下的氨基酸：

i)如SEQ?ID?NO:1所示，

ii)與如SEQ?ID?NO:1所示的序列至少95%相同，或

iii)i)或ii)的片段，其具有有機(jī)磷酸酯水解活性和/或至少270個(gè)氨基酸長，

其中，所述多肽包含下列中的一種或更多或全部；

a)在與SEQ?ID?NO:1的氨基酸51位相對應(yīng)位置上的纈氨酸；

b)在與SEQ?ID?NO:1的氨基酸63位相對應(yīng)位置上的丙氨酸；

c)在與SEQ?ID?NO:1的氨基酸156位相對應(yīng)位置上的精氨酸；

d)在與SEQ?ID?NO:1的氨基酸203位相對應(yīng)位置上的谷氨酸；以及

e)在與SEQ?ID?NO:1的氨基酸236位相對應(yīng)位置上的天冬氨酸。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多肽，其具有有機(jī)磷酸酯水解活性。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的多肽，其與氨基酸序列選自SEQ?ID?NO:2、SEQ?ID?NO:3和SEQ?ID?NO:4的第二多肽相比具有更強(qiáng)的有機(jī)磷酸酯水解活性。

4.根據(jù)權(quán)利要求2或權(quán)利要求3所述的多肽，其具有下列中的兩種或更多或全部：

i)與氨基酸序列選自SEQ?ID?NO:2、SEQ?ID?NO:3和SEQ?ID?NO:4的多肽相比，針對甲基毒死蜱高至少2倍的二級速率常數(shù)(k_cat/K_m)，

ii)與氨基酸序列選自SEQ?ID?NO:2、SEQ?ID?NO:3和SEQ?ID?NO:4的多肽相比，針對二嗪農(nóng)高至少1.5倍的二級速率常數(shù)(k_cat/K_m)，

iii)與氨基酸序列選自SEQ?ID?NO:2、SEQ?ID?NO:3和SEQ?ID?NO:4的多肽相比，針對乙基對硫磷高至少2倍的二級速率常數(shù)(k_cat/K_m)，或者

iv)與氨基酸序列選自SEQ?ID?NO:2、SEQ?ID?NO:3和SEQ?ID?NO:4的多肽相比，針對乙基毒死蜱高至少1.2倍的催化常數(shù)(k_cat)。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的多肽，其具有：

i)與氨基酸序列選自SEQ?ID?NO:2、SEQ?ID?NO:3和SEQ?ID?NO:4的多肽相比，針對甲基毒死蜱高至少2倍的二級速率常數(shù)(k_cat/K_m)，

ii)與氨基酸序列選自SEQ?ID?NO:2、SEQ?ID?NO:3和SEQ?ID?NO:4的多肽相比，針對二嗪農(nóng)高至少1.5倍的二級速率常數(shù)(k_cat/K_m)，

iii)與氨基酸序列選自SEQ?ID?NO:2、SEQ?ID?NO:3和SEQ?ID?NO:4的多肽相比，針對乙基對硫磷高至少2倍的二級速率常數(shù)(k_cat/K_m)，和

iv)與氨基酸序列選自SEQ?ID?NO:2、SEQ?ID?NO:3和SEQ?ID?NO:4的多肽相比，針對乙基毒死蜱高至少1.2倍的催化常數(shù)(k_cat)。

6.根據(jù)權(quán)利要求2至5的任一項(xiàng)所述的多肽，其中所述有機(jī)磷酸酯的離去基團(tuán)具有低于8的pKa。

7.根據(jù)權(quán)利要求2至6的任一項(xiàng)所述的多肽，其中所述有機(jī)磷酸酯是芳香族非乙烯基有機(jī)磷酸酯。

8.根據(jù)權(quán)利要求6或權(quán)利要求7所述的多肽，其中所述有機(jī)磷酸酯是乙基對硫磷、甲基對硫磷、二嗪農(nóng)、乙基毒死蜱、甲基毒死蜱或馬拉硫磷。