[發明專利]用于確定蛋白水解酶活性的方法(變體)、用于實現該方法的裝置以及診斷方法

無效

• 申請號: 201280045249.3
• 申請日: 2012-07-16
• 公開（公告）號: CN103998620A
• 公開（公告）日: 2014-08-20
• 發明（設計）人: 法佐伊爾·伊諾亞托維奇·阿陶拉哈諾夫;納塔利婭·米哈伊洛芙娜·達什克維奇;米哈伊爾·弗拉基米羅維奇·奧瓦涅索夫;瓦西里·伊萬諾維奇·薩爾巴什;米哈伊爾·亞歷山德羅維奇·潘捷列夫;謝爾蓋·謝爾蓋耶維奇·卡拉姆津;安德烈·尤爾耶維奇·孔德拉托維奇
• 申請（專利權）人: 血液有限責任公司
• 主分類號: C12Q1/56
• 分類號: C12Q1/56;G01N21/76;G01N21/64;G01N33/48
• 代理公司: 北京康信知識產權代理有限責任公司 11240
• 代理人: 余剛;張英

1.一種用于確定非均勻系統中蛋白水解酶活性的時空分布的方法，所述方法包括下列步驟：

提供體外系統，其包含測試介質樣品和分布在所述測試介質樣品中的蛋白水解酶或其酶原，所述測試介質選自由以下所組成的組中：血漿、全血、水、淋巴、膠體溶液、晶體溶液或凝膠；

將熒光底物浸入所述體外系統中，在通過所述蛋白水解酶切割所提及的底物期間伴隨標志物的進一步釋放；

在預定的時間，光照所述測試介質樣品以激發所述標志物的熒光；

在預定的時間，與所述光照同時記錄所述樣品中標志物熒光信號的空間分布；

考慮介質中所述標志物與所述介質的組分的結合，通過解決“反應-擴散-對流”型逆問題，由所述標志物的熒光信號的分布集合確定所述蛋白水解酶活性的時空分布。

2.一種用于確定非均勻系統中蛋白水解酶活性的時空分布的方法，所述方法包括下列步驟：

提供體外系統，其包含測試介質樣品和分布在所述測試介質樣品中的蛋白水解酶或其酶原，所述測試介質選自由以下所組成的組中：血漿、全血、水、淋巴、膠體溶液、晶體溶液或凝膠；

將生色底物浸入所述體外系統中，在通過蛋白水解酶切割所提及的底物期間伴隨標志物的進一步釋放；

在預定的時間，通過具有對應于由所述標志物大量吸收的光的波長的光照射所述測試介質樣品；

在預定的時間，記錄所述樣品中所述標志物的光吸收的空間分布；

考慮介質中所述標志物與所述介質的組分的結合，通過解決“反應-擴散-對流”型逆問題，從所述標志物的發色團信號的分布集合確定(限定或計算)所述蛋白水解酶活性的時空分布。

3.一種用于確定非均勻系統中蛋白水解酶活性的時空分布的方法，所述方法包括下列步驟：

提供體外系統，其包含測試介質樣品和分布在所述測試介質樣品中的蛋白水解酶或其酶原，所述測試介質選自由以下所組成的組中：血漿、全血、水、淋巴、膠體溶液、晶體溶液或凝膠；

將發光底物浸入所述體外系統中，在通過蛋白水解酶切割所提及的底物期間伴隨標志物的進一步釋放；

在預定的時間，記錄所述樣品中所述標志物的發光信號的空間分布；

考慮介質中所述標志物與所述介質的組分的結合，通過解決“反應-擴散-對流”型逆問題，由所述標志物的發光信號的分布集合確定(限定或計算)所述蛋白水解酶活性的時空分布。

4.根據權利要求1-3中任一項所述的方法，其中，另外將活化劑放入所述體外系統中以引起所述蛋白水解酶活性時空分布的變化。

5.根據權利要求4所述的方法，其中，所述活化劑是選自由以下所組成的組中的試劑：固定在表面上的組織因子、可溶性組織因子、組織型纖維蛋白溶酶原活化因子、具有組織因子表達能力的細胞、體組織樣品、玻璃或塑料。

6.根據權利要求1-3中任一項所述的方法，其中，在預定的時間進行所述測試樣品介質另外的光照，并記錄所述測試樣品的空間參數，所述空間參數選自由以下所組成的組中：樣品中光散射的空間分布、樣品中光透射的空間分布或它們的組合。

7.根據權利要求1-3中任一項所述的方法，其中，將所述底物作為溶液加入到所述測試介質樣品中。

8.根據權利要求1-3中任一項所述的方法，其中，在將所述測試介質樣品放置其中之前，將所述底物以凍干形式施用于所述體外系統的壁上。

9.根據權利要求1-3中任一項所述的方法，其中，所述測試介質是選自由以下所組成的組中的血漿：富血小板血漿、無血小板血漿和乏血小板血漿。

10.根據權利要求1-3中任一項所述的方法，其中，以每分鐘1至1800次的頻率進行光照和所述標志物的熒光信號改變的記錄。

11.根據權利要求1-3中任一項所述的方法，其中，所述方法的所有步驟均是在約37℃的控制溫度進行的。

12.根據權利要求1-3中任一項所述的方法，其中，所述方法的所有步驟均是在穩定壓力進行的，優選高于大氣壓。

13.根據權利要求1-3中任一項所述的方法，其中，所述測試樣品的pH穩定在7.2-7.4的范圍內。