[發(fā)明專利]臍帶提取物的制備方法和使用方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201280044164.3
• 申請日: 2012-07-11
• 公開（公告）號: CN103998048A
• 公開（公告）日: 2014-08-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 崔容秀;金仙美;李榮濬
• 申請（專利權(quán)）人: 車比奧及戴奧斯泰有限公司
• 主分類號: A61K35/44
• 分類號: A61K35/44;A61K35/12;C12N5/074;A61K8/98;A61P17/00
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務(wù)所 11105
• 代理人: 閔丹

1.一種制備哺乳動物臍帶提取物的方法，所述方法包括：

切割臍帶；

將該臍帶放到緩沖液中；

攪動浸在緩沖液中的臍帶；

并離心從所述攪動獲得的產(chǎn)物以獲得上清液。

2.依照權(quán)利要求1制備的臍帶提取物。

3.權(quán)利要求2的臍帶提取物，其中所述臍帶提取物包含胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-7(IGFBP-7)、脂籠蛋白-1、CXCL14、瘦素R、IL-23、MIP-1a、血管生成素、血小板反應(yīng)蛋白-2、IL-29和IL-4R的蛋白。

4.一種包含臍帶提取物的血清替代物。

5.權(quán)利要求4的血清替代物，其中所述臍帶提取物是依照權(quán)利要求1的方法制備的。

6.一種細胞培養(yǎng)基，其包含權(quán)利要求4的血清替代物。

7.權(quán)利要求6的細胞培養(yǎng)基，其中所述細胞是動物細胞。

8.權(quán)利要求7的細胞培養(yǎng)基，其中所述動物細胞是干細胞。

9.權(quán)利要求8的細胞培養(yǎng)基，其中所述干細胞是臍帶來源的干細胞。

10.一種用于組織修復(fù)的填充劑，其包含臍帶提取物。

11.權(quán)利要求10的用于組織修復(fù)的填充劑，其中所述臍帶提取物是依照權(quán)利要求1的方法制備的。

12.一種從哺乳動物臍帶分離干細胞的方法，所述方法包括：

將分塊的臍帶組織與包含哺乳動物臍帶提取物的細胞培養(yǎng)基組合物放置到細胞培養(yǎng)容器中；

將所述臍帶組織用酶處理；并

從所述臍帶組織分離干細胞。

13.權(quán)利要求12的方法，其中所述細胞培養(yǎng)容器用細胞粘附蛋白包被。

14.權(quán)利要求12的方法，其中所述細胞粘附蛋白選自下組：哺乳動物胎盤來源的膠原、明膠、纖連蛋白、核纖層蛋白和聚-D-溶素。

15.一種培養(yǎng)干細胞的方法，所述方法包括：

向干細胞培養(yǎng)基添加臍帶提取物；并

通過使用所述干細胞培養(yǎng)基在細胞培養(yǎng)容器中培養(yǎng)干細胞。

16.權(quán)利要求15的方法，其中所述細胞培養(yǎng)容器用細胞粘附蛋白包被。

17.權(quán)利要求15的方法，其中所述干細胞是組織來源的干細胞。

18.權(quán)利要求16的方法，其中所述組織選自下組：脂肪、臍帶、肝和骨膜。

19.權(quán)利要求15的方法，其中所述干細胞培養(yǎng)基不包含血清。

20.權(quán)利要求15的方法，其中所述細胞粘附蛋白選自下組：哺乳動物胎盤來源的膠原、明膠、纖連蛋白、核纖層蛋白和聚-D-溶素。

21.權(quán)利要求15的方法，其中所述干細胞是表達至少一種選自下組的基因的細胞：Oct4、Sox2、KLF4和Nanog。

22.權(quán)利要求15的方法，其中所述干細胞對于CD29、CD73、CD90、CD105和CD166是選擇性陽性的，而對于CD34和CD45是選擇性陰性的。

23.權(quán)利要求15的方法，其中當通過使用臍帶提取物來培養(yǎng)所述干細胞時，所述干細胞甚至在傳代培養(yǎng)時均持續(xù)表達至少一種選自下組的基因：Oct4、Sox2、KLF4和Nanog，所述基因都是胚胎干細胞特異性基因。