[發(fā)明專利]具有病毒感染增強(qiáng)性質(zhì)的肽及其用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201280041341.2
• 申請(qǐng)日: 2012-06-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104080799B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-03-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 達(dá)維德·弗納爾;安托萬(wàn)·基希勒;薩米亞·馬丁
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 吉尼松公司;國(guó)家科學(xué)研究中心;國(guó)家健康科學(xué)研究所
• 主分類號(hào): C07K14/00
• 分類號(hào): C07K14/00;C12N15/86
• 代理公司: 隆天知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 72003
• 代理人: 吳小瑛;王芝艷

本發(fā)明涉及肽及其功能性衍生物以及其用于提高病毒侵入靶細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的用途。

背景技術(shù)

基因治療方法經(jīng)常因靶細(xì)胞對(duì)重組病毒載體的低轉(zhuǎn)導(dǎo)效率而受阻礙。逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，尤其是基于人類免疫缺陷病毒1(HIV-1)的慢病毒載體(LV)是有前途的用于基因治療的運(yùn)載體（vehicle）(D'Costa等人，2009)。這些載體目前在臨床應(yīng)用中用于治療各種疾病，如免疫缺陷疾病、神經(jīng)變性或神經(jīng)性疾病、貧血、HIV感染。一些逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的應(yīng)用依賴于特異性靶細(xì)胞的離體轉(zhuǎn)導(dǎo)，如表達(dá)CD34標(biāo)志物的造血干/祖細(xì)胞（造血干細(xì)胞/造血祖細(xì)胞）。對(duì)使用重組慢病毒顆粒的限制因素是在生產(chǎn)重組慢病毒載體顆粒的過(guò)程中獲得具有高感染滴度的能力。避免這種限制的一種方法是在純化步驟中濃縮病毒上清(Rodrigues等人，2007)。然而，對(duì)于一些LV，很難建立純化工序，這取決于用于假型病毒顆粒的包膜糖蛋白-如GALVTR-LV(具有融合到雙嗜性鼠白血病病毒(MLV-A)包膜糖蛋白的胞質(zhì)尾的長(zhǎng)臂猿白血病病毒包膜糖蛋白的假型LV(Sandrin等人，2002))就是這種情況。因此，許多慢病毒載體制劑具有低滴度，并被限制了轉(zhuǎn)導(dǎo)功效。另一個(gè)限制因素是慢病毒載體自身感染靶細(xì)胞的能力。多種包膜糖蛋白如VSV-G、RD114TR、GALVTR可用于假型慢病毒載體，并對(duì)靶細(xì)胞如CD34+細(xì)胞具有可變的感染性(Sandrin等人，2002)。避免這些限制的一種策略是添加輔助因子以優(yōu)化轉(zhuǎn)導(dǎo)工序，如陽(yáng)離子聚合物(如聚凝胺)或纖連蛋白片段(如Retronectin)(Davis等人，2004；Pollok等人，1999)。美國(guó)專利No.7,759,467公開(kāi)了利用逆轉(zhuǎn)錄病毒以增加造血細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的方法，其包括在纖連蛋白或纖連蛋白片段存在的情況下感染細(xì)胞。然而，所提出的方法并不能令人完全滿意，至少由于以下兩個(gè)原因：首先，用于提高逆轉(zhuǎn)錄病毒效率的纖連蛋白片段存在顯著的經(jīng)濟(jì)上的弊端，這是因?yàn)槠渫ǔ：屑s270或更多的氨基酸。此外，使用纖連蛋白或纖連蛋白片段需要將培養(yǎng)板包被并將病毒上清預(yù)裝載到固定化的纖連蛋白片段上。這兩個(gè)步驟是難以標(biāo)準(zhǔn)化的，并可能導(dǎo)致一定程度的依賴于所使用的纖連蛋白片段和病毒上清的濃度的靶細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)的飽和(Novelli等人，1999)。

有趣的是，最近人類精液中的稱之為SEVI的天然陽(yáng)離子肽被鑒定為強(qiáng)HIV-1感染性增強(qiáng)子(Munch等人，2007；Roan等人，2009)。這一家族的肽也公開(kāi)在國(guó)際申請(qǐng)No.PCT/EP2007/050727中，該國(guó)際申請(qǐng)公開(kāi)了促進(jìn)細(xì)胞病毒感染的人前列腺酸性磷酸酶的240-290的氨基酸殘基片段。

國(guó)際申請(qǐng)No.PCT/FR02/01772中公開(kāi)了在pH7.4具有大于或等于2的絕對(duì)電荷的兩親陽(yáng)離子肽，并且包含至少一種親水部分，所述部分包括至少三個(gè)殘基，其能夠于pH值小于7.4時(shí)被質(zhì)子化以轉(zhuǎn)運(yùn)核酸或蛋白到細(xì)胞內(nèi)。此文獻(xiàn)沒(méi)有公開(kāi)或暗示使用該類肽以提高病毒或病毒載體的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。此外，這些兩親陽(yáng)離子肽含有抗菌活性(Mason等人，2009)。

本發(fā)明的目的是提供用于提高病毒或病毒載體的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的方法，如用于提高將基因?qū)氚屑?xì)胞。由于肽在其生物可降解性質(zhì)、其縮小的尺寸、表征和大規(guī)模生產(chǎn)的簡(jiǎn)易性方面是令人感興趣的，已進(jìn)行了大量研究來(lái)鑒定能替代纖連蛋白和SEVI肽的替代物。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)，如權(quán)利要求中所定義的特定的肽具有在真核細(xì)胞中促進(jìn)病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的性質(zhì)，特別是在人原代造血祖/干細(xì)胞中。

根據(jù)一個(gè)方面，本發(fā)明涉及LAH4肽或其功能性衍生物在促進(jìn)病毒或病毒載體感染真核細(xì)胞中的用途。

根據(jù)另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種用病毒或病毒載體感染真核細(xì)胞的方法，特別是一種體外或離體的方法，其包含在LAH4肽或其功能性衍生物存在的情況下，將細(xì)胞與病毒或病毒載體相接觸。

根據(jù)另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種用病毒載體增加基因轉(zhuǎn)運(yùn)到靶細(xì)胞中的效率的方法，特別是一種體內(nèi)或離體的方法，其包含在LAH4肽或其功能性衍生物存在的情況下，將病毒載體與靶細(xì)胞相接觸，以促進(jìn)核酸序列(如基因、cDNA、siRNA、shRNA、允許產(chǎn)生反義寡核苷酸的序列)轉(zhuǎn)運(yùn)到靶細(xì)胞中。

根據(jù)另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種診斷受試者中病毒感染的方法，其包括將受試者的樣品與真核細(xì)胞和LAH4肽或其功能性衍生物進(jìn)行孵育，以擴(kuò)增包含于所述樣品的任何病毒，并鑒定所擴(kuò)增的病毒。

根據(jù)另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及新的LAH4衍生肽。