[發(fā)明專利]用于生產(chǎn)痘苗病毒的方法和組合物

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201280038029.8
• 申請(qǐng)日: 2012-08-03
• 公開（公告）號(hào): CN103732236A
• 公開（公告）日: 2014-04-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: D·克恩;J·貝爾
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 詹納里克斯公司
• 主分類號(hào): A61K35/76
• 分類號(hào): A61K35/76;C12N15/86
• 代理公司: 中國(guó)國(guó)際貿(mào)易促進(jìn)委員會(huì)專利商標(biāo)事務(wù)所 11038
• 代理人: 林遠(yuǎn)成

相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用

本申請(qǐng)要求2011年8月5日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/515,724的權(quán)益，其整個(gè)內(nèi)容通過引用并入本文。

發(fā)明背景

I.技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明的實(shí)施方案一般地涉及病毒學(xué)、醫(yī)學(xué)和病毒治療劑。某些實(shí)施方案涉及病毒生產(chǎn)方法。

II.背景

溶瘤病毒(OV)是已經(jīng)經(jīng)過設(shè)計(jì)和選擇而在腫瘤細(xì)胞中特異性地生長(zhǎng)并殺死腫瘤細(xì)胞的復(fù)制治療劑。基于臨床前動(dòng)物模型和在人類中的早期臨床數(shù)據(jù)，幾個(gè)組處于商業(yè)化的早期階段。但是，本領(lǐng)域仍然面臨的一個(gè)挑戰(zhàn)是，生產(chǎn)大規(guī)模藥用級(jí)病毒用于遞送給患者。病毒是生物實(shí)體而不是合成的藥物，因而生產(chǎn)方法包括在細(xì)胞內(nèi)生產(chǎn)病毒和隨后除去污染性的細(xì)胞碎片，同時(shí)維持感染效能。迄今為止，大部分（如果不是全部的話）的用于人用的痘苗病毒產(chǎn)品的商業(yè)生產(chǎn)已經(jīng)成為在非人細(xì)胞培養(yǎng)物中的疫苗。一般而言，對(duì)于疫苗應(yīng)用，患者在局部部位(經(jīng)常肌肉內(nèi))接受低劑量的病毒，其中污染性的細(xì)胞蛋白可以實(shí)際上充當(dāng)佐劑來增加制劑的免疫原性。相比而言，對(duì)于溶瘤病毒治療劑，需要的病毒的劑量是多達(dá)疫苗應(yīng)用的數(shù)百萬倍，且可以靜脈內(nèi)地、顱內(nèi)地、腹膜內(nèi)地或通過直接腫瘤注射來施用。在OV的情況下，關(guān)鍵的是，能夠生產(chǎn)大量不含污染性非人細(xì)胞碎片的病毒。此外，痘苗病毒是將宿主細(xì)胞蛋白摻入病毒膜中的有包膜病毒。將人蛋白摻入病毒包膜中會(huì)增加它的移動(dòng)能力，而不被人宿主免疫系統(tǒng)檢測(cè)到。

仍然需要用于大規(guī)模溶瘤病毒生產(chǎn)的額外方法和組合物。

發(fā)明內(nèi)容

已經(jīng)在以懸浮培養(yǎng)方式培養(yǎng)的HeLa細(xì)胞中生產(chǎn)痘苗病毒。但是，懸浮培養(yǎng)條件目前不適合用于病毒的大規(guī)模生產(chǎn)。因而，使用HeLa細(xì)胞大規(guī)模或商業(yè)規(guī)模生產(chǎn)痘苗病毒的嘗試尚未成功。此外，預(yù)期附著性HeLa細(xì)胞系不會(huì)生產(chǎn)足夠數(shù)目的細(xì)胞來確保使用附著性HeLa細(xì)胞生產(chǎn)大規(guī)模生產(chǎn)所需的數(shù)量的痘苗病毒。本申請(qǐng)描述了使用附著性HeLa細(xì)胞大規(guī)模生產(chǎn)痘苗病毒的方法。

某些實(shí)施方案涉及生產(chǎn)痘苗病毒的方法，所述方法包括一個(gè)或多個(gè)下述步驟。

在某些方面，所述方法包括：過使附著性HeLa細(xì)胞與痘苗病毒接觸，用痘苗病毒感染附著于表面的HeLa細(xì)胞。優(yōu)選地，所述痘苗病毒是重組痘苗病毒，諸如在美國(guó)專利申請(qǐng)公開號(hào)2009/0004723（通過引用整體并入本文）的段落中描述的那些。在某些實(shí)施方案中，從權(quán)利要求的范圍中特別地排除附著于培養(yǎng)皿的HeLa細(xì)胞。在幾個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種生產(chǎn)痘苗病毒的方法，其包括：(a)用痘苗病毒感染附著于表面的HeLa細(xì)胞，(b)在允許生產(chǎn)后代病毒的條件下，培養(yǎng)受感染的細(xì)胞，和(c)從培養(yǎng)物收獲痘苗病毒。

在某些實(shí)施方案中，提供了生產(chǎn)痘苗病毒的方法，其包括：(a)通過使至少1x10⁷個(gè)、1x10⁸個(gè)、5x10⁸1x10⁹個(gè)、5x10⁹個(gè)、1x10¹⁰個(gè)、5x10¹⁰個(gè)、1x10¹¹個(gè)、5x10¹¹個(gè)、1x10¹²個(gè)、5x10¹²個(gè)、1x10¹³個(gè)、5x10¹³個(gè)或更多個(gè)（包括其間的所有值和范圍）附著性HeLa細(xì)胞與痘苗病毒組合物接觸，用重組痘苗病毒感染附著于表面的HeLa細(xì)胞；和(b)在允許生產(chǎn)50個(gè)、60個(gè)、70個(gè)、80個(gè)、90個(gè)、100個(gè)或更多個(gè)（包括其間的所有值和范圍）重組痘苗病毒/細(xì)胞的條件下，培養(yǎng)受感染的細(xì)胞。優(yōu)選地，根據(jù)所述方法生產(chǎn)至少50噬斑形成單位(pfu)痘苗病毒/HeLa細(xì)胞，更優(yōu)選地生產(chǎn)至少75pfu痘苗病毒/HeLa細(xì)胞。

在其它實(shí)施方案中，以0.001至1.0、優(yōu)選0.005至0.5、更優(yōu)選0.01至0.1的感染復(fù)數(shù)(m.o.i.)，用痘苗病毒感染附著于表面的HeLa細(xì)胞。在一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述m.o.i.是0.01至0.05，包括其間的所有值和范圍。在其它優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述m.o.i.是0.015至0.03。術(shù)語“感染復(fù)數(shù)”或“m.o.i.”表示在感染過程中添加的病毒的噬斑形成單位(pfu)/HeLa細(xì)胞之比。