[發(fā)明專利]用于生產痘苗病毒的方法和組合物

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201280038029.8
• 申請日: 2012-08-03
• 公開（公告）號: CN103732236A
• 公開（公告）日: 2014-04-16
• 發(fā)明（設計）人: D·克恩;J·貝爾
• 申請（專利權）人: 詹納里克斯公司
• 主分類號: A61K35/76
• 分類號: A61K35/76;C12N15/86
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 林遠成

1.一種用于生產痘苗病毒的方法，所述方法包括：

(a)通過使HeLa細胞與痘苗病毒以0.005-1.0噬斑形成單位(pfu)/細胞的感染復數(m.o.i.)接觸，用痘苗病毒感染附著于表面的所述HeLa細胞；

(b)在具有高于7.1的pH的感染培養(yǎng)基中，培養(yǎng)受感染的細胞；和

(c)從培養(yǎng)物收獲痘苗病毒。

2.根據權利要求1所述的方法，其中在步驟(a)過程中附著性HeLa細胞的密度是10⁴-10⁶個HeLa細胞/cm²。

3.根據權利要求2所述的方法，其中在步驟(a)過程中附著性HeLa細胞的密度是約10⁵個HeLa細胞/cm²。

4.根據權利要求1-3中的任一項所述的方法，其中所述HeLa細胞附著于單元體、細胞工廠、T-燒瓶、滾瓶或微載體。

5.根據權利要求4所述的方法，其中所述HeLa細胞附著于一個或多個塑料滾瓶容器。

6.根據權利要求5所述的方法，其中所述一個或多個滾瓶包含至少168,000cm²的培養(yǎng)面積。

7.根據權利要求1-6中的任一項所述的方法，其中在步驟(a)過程中的痘苗病毒的濃度是在10³-10⁵pfu/ml。

8.根據權利要求7所述的方法，其中在步驟(a)過程中的痘苗病毒的濃度是約10⁴pfu/ml。

9.根據權利要求1-8中的任一項所述的方法，其中所述感染培養(yǎng)基的pH是高于7.2，且優(yōu)選為約7.3。

10.根據權利要求1-9中的任一項所述的方法，其中在36℃至37.5℃的溫度、優(yōu)選在37℃下進行步驟(a)和(b)。

11.根據權利要求1-10中的任一項所述的方法，其中進行步驟(b)持續(xù)40-80小時、優(yōu)選約44小時的時段。

12.根據權利要求1-11中的任一項所述的方法，其中生產至少50pfu痘苗病毒/HeLa細胞，優(yōu)選生產至少75pfu痘苗病毒/HeLa細胞。

13.根據權利要求1-12中的任一項所述的方法，其中所述培養(yǎng)基不包含下述的一種或多種：硫酸葡聚糖、PluronicF-68、聚山梨酯80和大豆水解物。

14.根據權利要求13所述的方法，其中所述培養(yǎng)基不包含硫酸葡聚糖。

15.根據權利要求14所述的方法，其中所述培養(yǎng)基缺少硫酸葡聚糖、PluronicF-68、聚山梨酯80和大豆水解物。

16.根據權利要求1-15中的任一項所述的方法，其中所述培養(yǎng)基包含胎牛血清。

17.根據權利要求16所述的方法，其中所述培養(yǎng)基包含小于10%的胎牛血清。

18.根據權利要求1-15中的任一項所述的方法，其中所述培養(yǎng)基不包含血清。

19.根據權利要求1-18中的任一項所述的方法，其中步驟(a)的所述m.o.i.是約0.01-0.5pfu/細胞，且優(yōu)選為約0.02pfu/細胞。

19.根據權利要求1-18中的任一項所述的方法，其中使收獲的病毒進行一個或多個純化步驟。

20.根據權利要求19所述的方法，其中所述純化包括：用核酸酶處理所述收獲的病毒以除去HeLa細胞核酸，和/或用蛋白酶處理所述收獲的病毒以除去HeLa細胞蛋白。

21.根據權利要求19或20所述的方法，其中所述純化包括切向流過濾步驟。

22.根據權利要求19-21中的任一項所述的方法，其中所述純化包括肝素親和色譜法步驟。

23.根據權利要求19-22中的任一項所述的方法，其中所述純化包括膜吸收色譜法步驟。

24.根據權利要求1-23中的任一項所述的方法，其中所述痘苗病毒是痘苗病毒的IHD-J、Wyeth、Western?Reserve或哥本哈根株。