[發明專利]無去污劑制備革蘭氏陰性細菌外膜泡囊的方法

在審

• 申請號: 201280033688.2
• 申請日: 2012-07-05
• 公開（公告）號: CN103687612A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: B·范德沃特比姆德;L·A·范德波爾
• 申請（專利權）人: 由衛生福利和體育大臣代表的荷蘭王國
• 主分類號: A61K39/095
• 分類號: A61K39/095;A61P39/04
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司 72002
• 代理人: 張曉威

發明領域

本發明涉及醫學微生物學和疫苗的領域。本發明特別涉及無去污劑制備在疫苗中使用的革蘭氏陰性細菌外膜泡囊(OMV)的方法、可通過所述方法獲得的OMV，以及包含這樣的OMV的藥物組合物。本發明還涉及本發明的OMV作為藥劑的用途，特別是其在誘發免疫應答的方法中的用途。

發明背景

腦膜炎奈瑟球菌(Neisseria?meningitidis)是可引起急性腦膜炎和敗血癥的人病原體，其致死率約15％[Girard等人，2006]。血清群B腦膜炎在北美洲占腦膜炎病例的30-40％[Sharip等人，2006；Kaplan等人，2006]，并且在一些歐洲國家中占高達80％[Trotter等人，2007；Gray等人，2006]，然而仍沒有可用的廣泛保護性疫苗。已經基于綴合至載體蛋白的莢膜多糖，研發了針對其它血清群的有效疫苗[Snape等人，2008]。對于血清群B，由于較差的免疫原性[Morley等人，2001]，以及對于疫苗接種引發的自身免疫的擔心[Finne等人，1983]，該方法不可行。至今，基于外膜泡囊(OMV)的疫苗是唯一成功地控制血清群B傳染病的疫苗，如在挪威、古巴和新西蘭[Bjune等人，1991；Thornton等人，2006；Martin等人，1998；Sierra等人，Fredriksen等人，1991]的實例。

OMV從革蘭氏陰性細菌的外膜釋放，其由包含外膜蛋白的磷脂(PL)雙分子層、脂多糖(LPS)和胞質組分組成[Deatherage等人，2009]。PorA蛋白被鑒定為是OMV中的主要保護性抗原，但它在傳播的血清群B菌株之間是高度可變的，這使疫苗的研發復雜化[Saukkonen等人，1989；Martin等人，2006]。因此，Rijks?Instituut?voor?Volksgezondheid?en?Milieu(RIVM)，即國家公共衛生和環境研究所(Bilthoven，荷蘭)研發了基于表達多種PorA亞型的基因修飾的腦膜炎奈瑟球菌菌株的OMV疫苗。起初，該多價OMV疫苗由2種總共表達6種PorA亞型的三價PorA菌株制備[van?der?Ley等人，1995；Claassen等人，1996]，并且在II期臨床試驗中提供了功能性免疫原性。為了確保對于全球傳播的血清群B菌株的足夠覆蓋，加入了第三種三價菌株[van?den?Dobbelsteen等人，2007]。

傳統上通過去污劑提取(dOMV純化方法)來制備OMV疫苗，以移除LPS，并增強泡囊釋放。腦膜炎奈瑟球菌的LPS是高毒性的，但是需要殘留量(約1％)來維持泡囊結構并輔助針對PorA的免疫應答[Arigita等人，2005；Arigita等人，2003；Steeghs等人，2004]。通過適度的去污劑濃度，dOMV純化方法滿足這些要求，然而其還有重要缺點。連同LPS，去污劑移除有助于免疫原性的PL以及脂蛋白(例如因子H結合蛋白)[Koeberling等人，2009；Koeberling等人，2008]。所產生的免疫應答直接針對特定的PorA亞型，而不引發交叉保護[Morley等人，2001；van?der?Voort等人，1996]。此外，LPS和PL的選擇性移除改變原始的泡囊結構，并且促進聚集[Holst等人，2009；Cametti等人，2008]。為了降低LPS毒性，需要進行去污劑處理，但這具有使疫苗研發復雜化的有害的副作用。