[發(fā)明專利]人源化CD52抗體

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201280033384.6
• 申請(qǐng)日: 2012-06-01
• 公開（公告）號(hào): CN103649122B
• 公開（公告）日: 2017-09-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: T·D·瓊斯;R·G·E·霍爾蓋特;F·J·凱爾
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 安迪拓普有限公司
• 主分類號(hào): C07K16/28
• 分類號(hào): C07K16/28
• 代理公司: 北京北翔知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司11285
• 代理人: 蔡倫,張廣育

本發(fā)明涉及抗人CD52的新人源化抗體，以及其在治療或預(yù)防人疾病的方法中的用途。

背景技術(shù)

CD52是一種糖基化的糖基磷脂酰肌醇（GPI）錨定的細(xì)胞表面蛋白，豐富存在于多種正常和惡性的淋巴樣細(xì)胞上，特別是B細(xì)胞和T細(xì)胞（Gilleece et al,Blood82807-812(1993)；Hale et al,J Biol Regul Homeost Agents,15p386-391(2001)；Rodig et al,Clin Cancer Res12,p7174-7179(2006)）。CD52在髓樣細(xì)胞例如單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞（DC）上以較低的水平表達(dá)，在成熟的自然殺傷（NK）細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和血液干細(xì)胞上幾乎不表達(dá)。CD52還由附睪和輸精管中的上皮細(xì)胞產(chǎn)生，被精子在通過生殖道的過程中獲得（Hale et al,ibid,;Domagala et al,Med Sci Monit7p325-331(2001)）。CD52的確切生物學(xué)功能尚不清楚，但一些證據(jù)表明，其可能涉及T細(xì)胞遷移和共刺激（Masuyama et al,J Exp Med189979-989(1999);Watanabe et al,Clin Immunol120247-259(2006)）。

Campath-1H（阿侖珠單抗、）是人源化的人CD52單克隆抗體，其表現(xiàn)出強(qiáng)的體外抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性（ADCC）和補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性（CDC）。CD52存在于至少95%的全部人外周血淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞上（Hale G.et al.,The CAMPATH-1antigen(CD52).Tissue Antigens1990,35:118-127）。Campath-1H識(shí)別由成熟CD52蛋白的羧基端四個(gè)氨基酸和帶負(fù)電荷的GPI錨的一部分組成的表位。由于其顯著的細(xì)胞毒性效應(yīng)，Campath-1H能夠在體內(nèi)耗盡CD52陽(yáng)性細(xì)胞，并且經(jīng)批準(zhǔn)用于慢性淋巴細(xì)胞性白血病（CLL）的一線和三線治療。已經(jīng)評(píng)估了Campath-1H在治療一些自身免疫性疾病中的效用，所述自身免疫性疾病包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、血管炎、肌炎、韋格納氏病和糖尿病。對(duì)Campath-1H的最前沿的研究是在治療復(fù)發(fā)緩解型多發(fā)性硬化（MS）方面。這些研究顯示，與人干擾素β-1a相比，復(fù)發(fā)的時(shí)間顯著改善（（即β干擾素-Ia））。

Campath-1H的主要限制是免疫原性，所述免疫原性在高達(dá)70%的患者中誘導(dǎo)了抗體（Therapeutic Monoclonal Antibodies:From Bench to Clinic,ed.Zhiqiang An(2009)ISBN:978-0-470-11791-0）。為了改善CD52抗體的臨床效用，非常需要在患者中與顯著的免疫原性沒有關(guān)聯(lián)的改良CD52抗體。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明涉及對(duì)人CD52（huCD52）有結(jié)合特異性的人源化免疫球蛋白。本發(fā)明還提供了以至少10^-8M的平衡解離常數(shù)（Kd）結(jié)合人CD52的人源化抗體。本發(fā)明還提供了特異性結(jié)合人CD52的人源化抗體，所述人源化抗體具有IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的抗體重鏈或使用突變的IgG恒定區(qū)，特別是增強(qiáng)ADCC（抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性）或CDC（補(bǔ)體依賴細(xì)胞毒性）的恒定區(qū)。本發(fā)明還提供了其中抗體輕鏈?zhǔn)铅瘦p鏈的人源化抗體。所述人源化抗體可由人IgG重鏈和人κ輕鏈核酸編碼，所述人IgG重鏈和人κ輕鏈核酸編碼如SEQ ID NO:20-SEQ ID NO:28列出的其可變區(qū)中的蛋白質(zhì)序列。

本發(fā)明還提供了特異性結(jié)合人CD52的人源化抗體，其中已經(jīng)對(duì)所述抗體可變區(qū)進(jìn)行了選擇或修飾以排除一個(gè)或多個(gè)人CD4+T細(xì)胞表位。本發(fā)明還提供了特異性結(jié)合人CD52的人源化抗體，其中已經(jīng)主要通過融合完全來自現(xiàn)有的人抗體可變區(qū)序列的序列片段形成所述抗體可變區(qū)。