[發(fā)明專利]用于在真核生物中調(diào)控基因表達或檢測和控制DNA座位的構(gòu)建體和方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201280025347.0
• 申請日: 2012-03-23
• 公開（公告）號: CN103732752A
• 公開（公告）日: 2014-04-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 克斯廷·拜斯特里奇;弗蘭克·加拉多;大衛(wèi)·萊恩;耐莉·杜巴里
• 申請（專利權(quán)）人: 國家科研中心
• 主分類號: C12N15/79
• 分類號: C12N15/79;C12Q1/25;C07K14/21;C07K19/00;C12N15/82
• 代理公司: 北京派特恩知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11270
• 代理人: 張穎玲;孟桂超

1.一種真核表達載體，包括編碼融合蛋白的核苷酸序列，所述融合蛋白包括對應(yīng)于屬于細菌DNA分離系統(tǒng)的DNA結(jié)合蛋白或其衍生物或片段的第一多肽，且該結(jié)合不需要任何其它因子。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的載體，其特征在于，所述屬于細菌DNA分離系統(tǒng)的DNA結(jié)合蛋白是來源于洋蔥伯克氏細菌的ParB蛋白。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的載體，其特征在于，所述屬于細菌DNA分離系統(tǒng)的DNA結(jié)合蛋白選自：

由Bcc的染色體1編碼的被定名為ParB-c1的ParB蛋白，諸如在NCBI基因組測序計劃中的N?YP-002229191下獲取的Bcc菌株J2315的蛋白；

由Bcc的染色體2編碼的被定名為ParB-c2且對應(yīng)于所附序列表中的SEQ?ID?NO:2蛋白的ParB蛋白，諸如在NCBI基因組測序計劃中的N?YP-002232636下獲取的Bcc菌株J2315的蛋白；

由Bcc的染色體3編碼的被定名為ParB-c3且對應(yīng)于所附序列表中的SEQ?ID?NO:4蛋白的ParB蛋白，諸如在NCBI基因組測序計劃中的N?YP-002153395下獲取的Bcc菌株J2315的蛋白；

由Bcc的質(zhì)粒編碼的被定名為ParB-p1的ParB蛋白，諸如在NCBI基因組測序計劃中的N?YP-002235439下獲取的Bcc菌株J2315的pBCJ2315質(zhì)粒的蛋白；

及它們的衍生物或片段。

4.根據(jù)權(quán)利要求1～3中任一項所述的載體，其特征在于，所述融合蛋白包括第二多肽，所述第二多肽是容易檢測到的多肽或參與基因表達調(diào)控的多肽。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的載體，其特征在于，所述容易檢測到的多肽是：

在特定條件下，諸如當適合的底物存在下被放置時，能夠產(chǎn)生可檢測到的、可選可計量的信號的酶；或者

生物發(fā)光或熒光的多肽。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的載體，其特征在于，所述參與基因表達調(diào)控的多肽選自：正轉(zhuǎn)錄因子或負轉(zhuǎn)錄因子、常規(guī)轉(zhuǎn)錄因子、啟動子的表達調(diào)控因子、染色質(zhì)重構(gòu)因子和修飾相鄰基因的位置的因子，及它們的衍生物或片段。

7.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的載體，其特征在于，所述載體包括操作性連接的：真核類型的啟動子、編碼融合蛋白的核苷酸序列及包括剪切位點和/或polyA信號的真核生物轉(zhuǎn)錄終止信號。

8.一種融合蛋白，包括：

對應(yīng)于屬于細菌DNA分離系統(tǒng)的DNA結(jié)合蛋白或其衍生物或片段的第一多肽，且該結(jié)合不需要任何其它因子；以及

參與基因表達調(diào)控的第二多肽。

9.一種融合蛋白，包括：

對應(yīng)于來源于洋蔥伯克氏細菌的ParB蛋白或其衍生物或片段的第一多肽；以及

容易檢測到的第二多肽。

10.一種分離的多聚核苷酸，選自以下不同的多聚核苷酸：

i）編碼如權(quán)利要求8或9中限定的融合蛋白的多聚核苷酸；

ii）與在第i）條中限定的所述多聚核苷酸互補的多聚核苷酸；

iii）具有能夠在高嚴格性條件下與在第i）條和第ii）條中限定的多聚核苷酸雜交的至少14個核苷酸且特別是具有至少18個核苷酸的多聚核苷酸。

11.一種真核載體，包括核苷酸序列及真核類型的可選擇的標記物，該核苷酸序列具有至少一個被屬于細菌DNA的分離系統(tǒng)的DNA結(jié)合蛋白識別的識別位點。

12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的載體，所述載體是整合型的。