[發(fā)明專(zhuān)利]包含抗胸苷酸合成酶的shRNA分子的脂質(zhì)體及其用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201280025004.4
• 申請(qǐng)日: 2012-05-22
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103561775A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-02-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 石田龍弘;黃政龍;和田洋巳
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 德?tīng)査浦扑幑煞萦邢薰?/a>
• 主分類(lèi)號(hào): A61K48/00
• 分類(lèi)號(hào): A61K48/00;A61K9/127;A61K31/513;A61K31/713;A61K45/00;A61K47/18;A61K47/24;A61K47/28;C12N15/113
• 代理公司: 中國(guó)專(zhuān)利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 孔青;梁謀

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及以包含抗胸苷酸合成酶的shRNA分子的脂質(zhì)體作為有效成分的抗腫瘤藥及其用途、特別是其與化療藥聯(lián)合使用的用途。

背景技術(shù)

近年來(lái)，引起RNA干擾(以下記作“RNAi”)的RNAi分子作為用于治療腫瘤等的有用工具而受到關(guān)注，人們正在開(kāi)發(fā)可以抑制腫瘤增殖的各種RNAi分子。本發(fā)明人以前報(bào)道過(guò)以參與DNA合成的胸苷酸合成酶(以下記作“TS”)為靶的RNAi分子，據(jù)報(bào)道，該RNAi分子通過(guò)顯著抑制TS的表達(dá)而具有抗腫瘤效果；另外，其還增強(qiáng)5-FU類(lèi)抗腫瘤藥(特別是替加氟·吉美嘧啶·奧替拉西鉀復(fù)方藥)的抗腫瘤效果(專(zhuān)利文獻(xiàn)1)。

但是，通常RNAi分子通過(guò)體內(nèi)給藥而迅速被分解。因此，向腫瘤遞送足夠量的RNAi分子是極其困難的。

為了解決該課題，目前，正在開(kāi)發(fā)各種RNAi分子的遞送方法。例如，可以列舉：將編碼RNAi分子(特別是具有短發(fā)夾結(jié)構(gòu)的RNAi分子(shRNA))的DNA插入到適當(dāng)?shù)妮d體中，給予該載體的方法(專(zhuān)利文獻(xiàn)1)。但是，在該方法中，必須將該載體直接注入到腫瘤內(nèi)來(lái)進(jìn)行給藥，考慮到臨床應(yīng)用，希望有更容易的給藥方法(例如，靜脈內(nèi)給藥等)。另外，正在開(kāi)發(fā)使用由RNAi分子和脂質(zhì)體組成的復(fù)合體(lipoplex)將RNAi分子遞送到腫瘤細(xì)胞中的方法(非專(zhuān)利文獻(xiàn)1-3)。但是，在上述lipoplex的重復(fù)給藥時(shí)，由于被給藥的生物體內(nèi)的免疫系統(tǒng)的作用，lipoplex快速被排除，出現(xiàn)無(wú)法得到充分的效果、而且產(chǎn)生嚴(yán)重的副作用等問(wèn)題。

因此，在該領(lǐng)域中，依然迫切希望有一種通過(guò)體內(nèi)給藥將RNAi分子有效率地遞送到腫瘤中的方法。

現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)

專(zhuān)利文獻(xiàn)

專(zhuān)利文獻(xiàn)1：WO2010/113844；

非專(zhuān)利文獻(xiàn)

非專(zhuān)利文獻(xiàn)1：Qixin?Leng等人，Drug?Future.?2009?September；34(9)：721；

非專(zhuān)利文獻(xiàn)2：Sherry?Y.?Wu等人，The?AAPS?Journal，第11卷，No.?4，Decmber?2009；

非專(zhuān)利文獻(xiàn)3：B.?Ozpolat等人，Journal?of?Internal?Medicine?267；44-53?2009。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明所要解決的課題

本發(fā)明的目的在于：提供一種以TS為靶的shRNA的簡(jiǎn)易且有效率的體內(nèi)遞送方法。

解決課題的方法

本發(fā)明人為了解決上述課題反復(fù)進(jìn)行了深入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：通過(guò)使可以抑制TS的表達(dá)的shRNA以靜電方式結(jié)合在進(jìn)行了PEG修飾的陽(yáng)離子性脂質(zhì)體表面，可以簡(jiǎn)易地將shRNA遞送到癌細(xì)胞中。另外還發(fā)現(xiàn)：通過(guò)將結(jié)合有shRNA的進(jìn)行了PEG修飾的陽(yáng)離子性脂質(zhì)體與化療藥、特別是5-FU類(lèi)抗腫瘤藥聯(lián)合使用，可以提高對(duì)癌細(xì)胞的靶向性，可以顯著增強(qiáng)其在癌細(xì)胞中的效果。進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)：通過(guò)將結(jié)合有shRNA的進(jìn)行了PEG修飾的陽(yáng)離子性脂質(zhì)體與具有TS抑制作用的化療藥(例如5-FU類(lèi)抗腫瘤藥或培美曲塞鈉水合物)聯(lián)合使用，可以提高癌細(xì)胞的對(duì)該化療藥的敏感性，可以增強(qiáng)抗腫瘤效果。本發(fā)明基于上述認(rèn)知。

即，本發(fā)明如下。

[1]?抗腫瘤藥，其包含通過(guò)RNAi作用可以抑制胸苷酸合成酶的表達(dá)的短發(fā)夾RNA(shRNA)和PEG修飾陽(yáng)離子性脂質(zhì)體，其中，該shRNA結(jié)合在該P(yáng)EG修飾陽(yáng)離子性脂質(zhì)體的表面，并且在3’末端至少具有由2個(gè)核苷酸組成的突出端。

[2]?[1]的抗腫瘤藥，其中，shRNA包含由SEQ?ID?NO:?1所表示的核苷酸序列組成的有義鏈和與該有義鏈在嚴(yán)格條件下雜交的反義鏈。

[3]?[1]或[2]的抗腫瘤藥，其中，shRNA包含由SEQ?ID?NO:?1所表示的核苷酸序列組成的有義鏈和由SEQ?ID?NO:?2所表示的核苷酸序列組成的反義鏈。

[4]?[1]～[3]中任一項(xiàng)所述的抗腫瘤藥，其中，shRNA由SEQ?ID?NO:?8所表示的核苷酸序列組成。

[5]?[1]～[4]中任一項(xiàng)所述的抗腫瘤藥，其中，PEG修飾陽(yáng)離子性脂質(zhì)體包括由二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)、棕櫚酰油酰甘油磷酰膽堿(POPC)、膽固醇(CHOL)和O,O’-雙十四酰基-N-(α-三甲基銨基乙酰基)二乙醇胺氯化物(DC-6-14)構(gòu)成的陽(yáng)離子性脂質(zhì)體。