[發明專利]用于從疫苗離析和量化抗原的方法

有效

• 申請號: 201280018905.0
• 申請日: 2012-04-18
• 公開（公告）號: CN103502263A
• 公開（公告）日: 2014-01-08
• 發明（設計）人: 米歇爾·格蘭因戈爾;馬丁·卡利沃達
• 申請（專利權）人: 巴克斯特國際公司;巴克斯特醫療保健股份有限公司
• 主分類號: C07K14/005
• 分類號: C07K14/005;C12N7/00;G01N33/68
• 代理公司: 中原信達知識產權代理有限責任公司 11219
• 代理人: 張穎;謝麗娜

1.一種用于從疫苗組合物離析抗原的方法，所述方法包括以下步驟：

(a)在沒有去污劑和沒有烷基化試劑的情況下溶解所述疫苗組合物中的所述抗原；以及

(b)通過分級分離來離析所述抗原或抗原亞型。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述溶解步驟通過還原進行。

3.根據權利要求2所述的方法，其中所述還原包括用二硫蘇糖醇處理所述疫苗組合物。

4.根據權利要求2所述的方法，其中所述溶解步驟還包括用離液劑變性。

5.根據權利要求2-4的任一項所述的方法，其中所述還原還通過酸化所述抗原或抗原亞型來進行，以防止在分離的抗原亞型之間形成二硫鍵。

6.一種用于量化包括抗原的疫苗組合物中的抗原或抗原亞型含量的方法，所述方法包括權利要求1-5的任一項所述的方法以及量化所述抗原或抗原亞型的另一步驟。

7.根據權利要求6所述的方法，其中所述量化步驟在不使用抗原標準品的情況下進行。

8.根據權利要求6所述的方法，其中所述量化步驟使用抗原標準品進行。

9.根據權利要求7-8的任一項所述的方法，其中所述量化步驟包括通過氨基酸分析量化抗原。

10.根據權利要求3-9的任一項所述的方法，其中所述還原包括約5分鐘至約20小時的孵育時間。

11.根據權利要求3-10的任一項所述的方法，其中所述還原包括約30分鐘至約2小時的孵育時間。

12.根據權利要求3-11的任一項所述的方法，其中所述還原包括約1小時的孵育時間。

13.根據權利要求3-12的任一項所述的方法，其中所述還原包括約20℃至約100℃的孵育溫度。

14.根據權利要求3-13的任一項所述的方法，其中所述還原包括約50℃至約90℃的孵育溫度。

15.根據權利要求3-14的任一項所述的方法，其中所述還原包括約85℃的孵育溫度。

16.根據權利要求4-15的任一項所述的方法，其中所述離液劑是鹽酸胍、脲、硫脲、鋰、高氯酸鹽或硫氰酸鹽。

17.根據權利要求4-16的任一項所述的方法，其中所述酸化用磷酸、鹽酸、硫酸、三氟乙酸、五氟丙酸、七氟丁酸或甲酸進行。

18.根據權利要求1-17的任一項所述的方法，其中分級分離通過色譜法進行。

19.根據權利要求18所述的方法，其中所述色譜法是高效液相色譜法(HPLC)、反相HPLC(RP-HPLC)、離子交換HPLC(IEX-HPLC)、親和色譜法、疏水相互作用色譜法(HIC)或尺寸排阻色譜法(SEC)。

20.根據權利要求19所述的方法，其中所述色譜法是反相(RP)-HPLC。

21.根據權利要求1-20的任一項所述的方法，其中所述抗原是病毒的或細菌的。

22.根據權利要求1-21的任一項所述的方法，其中所述抗原是血凝素(HA)。

23.根據權利要求1-22所述的方法，其中所述HA來自流感病毒疫苗組合物、麻疹病毒疫苗組合物、副流感病毒疫苗組合物或腮腺炎病毒疫苗組合物。

24.根據權利要求1-23的任一項所述的方法，其中所述疫苗組合物是流感病毒疫苗組合物。

25.根據權利要求23-24的任一項所述的方法，其中所述流感病毒疫苗組合物提供對選自由A型流感和B型流感組成的組的流感病毒的防護作用。

26.根據權利要求1-25的任一項所述的方法，其中所述抗原亞型是A型流感HA1、HA2、HA3、HA4、HA5、HA6、HA7、HA8、HA9、HA10、HA11、HA12、HA13、HA14、HA15和HA16與B型流感HA的任一種。

27.根據權利要求26所述的方法，其中所述抗原亞型是A型流感HA亞型HA1、HA2、HA3、HA5、HA7、HA9、HA10或B型流感HA。