[發明專利]識別和計數早期粒細胞(EGC)

有效

• 申請號: 201280016056.5
• 申請日: 2012-04-06
• 公開（公告）號: CN103597349A
• 公開（公告）日: 2014-02-19
• 發明（設計）人: C·A·拉米雷斯;陸九六
• 申請（專利權）人: 貝克曼考爾特公司
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50;G01N33/80
• 代理公司: 上海市華誠律師事務所 31210
• 代理人: 賈師英

技術領域

本發明說明書的實施方式一般涉及由粒子分析儀生成的細胞事件數據的分析，尤其是檢測和計數血液樣品中的早期粒細胞(Early?Granulated?Cell，EGC)。

背景技術

粒子分析儀用于分析生物細胞樣品以便確定樣品中包含的一個或多個類型細胞的計數和／或分布。粒子分析儀包括血液分析儀和流式細胞儀。血液分析儀和流式細胞儀通過收集和分析當細胞通過一個小孔或測量區域時產生的信號，來檢測和區分不同類型的血細胞，前述小孔或測量區域由一個或多個傳感器監測。例如，一份血液樣品流過測量區域，其中一個或多個電源和相關傳感器被設置為檢測對應于通過細胞的各種物理特性的信號。對應于在測量區域中單個細胞測量的一個或多個信號被稱為細胞事件(cellular?event)。然后對細胞樣品中多個細胞的細胞事件數據進行分析，以便確定基于細胞物理特性而被區分的種群。

物理性質如體積、傳導性、和光散射的測量被用于細胞分類。例如，體積、傳導性和散射(VCS)使用貝克曼考爾特的技術，在其他應用中，將白細胞分類成亞群或種群(population)。這些物理測量構成多維空間，其中擁有相似物理性質的細胞聚集成簇。每個簇對應于特定類型的血細胞群。

白細胞(WBC，也被稱為白細胞)計數是檢測病理疾病例如各種形式的感染的重要手段。五分法的白細胞分類(5-part?WBC?Differential)在血液疾病的檢測上一直是極有價值的試驗。該五分法分類用于對在外周血中常發現的白細胞五個主要亞型即嗜中性粒細胞、淋巴細胞、單核細胞、嗜曙紅白細胞和嗜堿白細胞進行檢測和計數。然而，也有其他類型的在成熟過程中間階段的白細胞。這些在成熟過程中間階段的白細胞包括母細胞、變異淋巴細胞、和早期的粒細胞(EGC)，也是血液疾病的標志物。術語EGC是指未成熟骨髓細胞的子集，主要包括早幼粒細胞，中幼粒細胞，及晚幼粒細胞。其他在成熟過程中間階段的細胞，例如，母細胞和桿狀核粒細胞一般不包括在EGC群中。

外周血中存在的EGC升高可能表明骨髓事件增強。例如，EGC計數可以提示敗血癥，這是細菌感染的一種嚴重形式。在一般情況下，循環EGC的增加在細菌感染時發生。EGC的存在提示由于感染或嚴重的炎癥性疾病，骨髓細胞增殖加強。EGC也可以在白血病、骨髓增生異常綜合征、和骨髓纖維化的患者身上發現。因此，對患者血液樣品快速準確地進行EGC計數對于急性感染、敗血癥和其他疾病的及時治療可能是非常值得的。通過加入EGC計數來加強常規的五分法白細胞分類檢測，可以大幅提供增強的診斷能力。

在傳統的分析方法中，EGC的存在與二維直方圖或分布圖中細胞事件群的形狀變化相關。基于一個或多個細胞群的形狀，傳統的粒子分析儀能夠向最終用戶提示未成熟或非典型細胞的存在。

EGC計數傳統上是通過手工血涂片分析完成。這個過程是具有一定勞動強度，并且由于各種因素如細胞計數低和人的主觀性，非常容易發生錯誤。

另一個EGC計數的常規方法是基于熒光。用聚甲炔(polymethine)染料對白細胞染色，該染料對每個細胞的RNA和DNA染色。然后可以將EGC與成熟粒細胞區別開，根據是EGC的RNA和DNA含量較高，從而導致熒光較強。然而，基于熒光的技術可能是昂貴的，可能不適用于相對成本較低的分析。因此能夠用非熒光的方法和儀器來測定EGC是有需要的。

此外，另一種方法已被公開，該方法僅基于DC來檢測未成熟粒細胞。然而，這種檢測的精度在如下情況中可能會受到損害：嗜中性粒細胞亞群、未成熟粒細胞亞群和桿狀核粒細胞的體積發生重疊。

另一種EGC計數的常規方法涉及使用一個或更多抗體例如CD16抗體的流式細胞儀分析。使用這種方法識別EGC是基于EGC細胞缺乏CD16染色。然而，該方法涉及多種抗體的使用以便依序控制不同的細胞類型。因此，使用抗體的流式細胞儀方法來識別EGC可能成本上不可行，并且由于一個或更多抗體的使用可能導致細胞的物理特性的改變。

因此，識別和計數血液樣品中EGC的有效方法和系統仍然是有需要的。

發明內容

本發明公開了在粒子分析儀中對待分析的血液樣品中早期的粒細胞(EGC)自動識別和計數的方法和系統。在一個實施方式中，用于識別血液樣品中EGC的方法包括使用低角光散射(1ow?angle?light?scatter，LALS)參數來分析血液樣品中的白細胞，使用LALS參數將EGC從其他白細胞中分離出來，并計數分離出的EGC。