[發明專利]生產能夠水解葉綠素或葉綠素衍生物的重組酶的方法

無效

• 申請號: 201280010050.7
• 申請日: 2012-02-16
• 公開（公告）號: CN103797114A
• 公開（公告）日: 2014-05-14
• 發明（設計）人: S.M.馬德赫
• 申請（專利權）人: 杜邦營養生物科學有限公司
• 主分類號: C12N9/18
• 分類號: C12N9/18;A23K1/165;C12N15/80;C12R1/885
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 鄒雪梅;李炳愛

1.一種生產能夠水解葉綠素或葉綠素衍生物的重組酶的方法，其包括所述重組酶在真核宿主細胞中的細胞內表達的步驟。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述宿主細胞為真菌細胞。

3.根據權利要求2所述的方法，其中所述宿主細胞來自木霉屬(Trichoderma)。

4.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述重組酶為葉綠素酶。

5.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述酶包括選自GHSXGG(SEQ?ID?NO：36)、DPVXG(SEQ?ID?NO：37)和YGHXD(SEQ?ID?NO：38)的一個或多個氨基酸序列。

6.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述重組酶來自擬南芥(Arabidopsis?thaliana)、甘藍(Brassica?oleracea)、蓖麻(Ricinus?communis)、銀杏(Ginkgo?biloba)、毛果楊(Populus?trichocarpa)、葡萄(Vitis?vinifera)、毛竹(Phyllostachys?heterocycla)、高粱(Sorghum?bicolor)、櫓豆(Glycine?max)、發財樹(Pachira?macrocarpa)、普通小麥(Triticum?aestivum)、甜橙(Citrus?sinensis)、玉米(Zea?mays)、藜(Chenopodium?album)、北美云杉(Picea?sitchensis)或萊茵衣藻(Chlamydomonas?reinhardtii)。

7.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述重組酶包含如在SEQ?ID?NO：1至18的任意一個中所定義的多肽序列或其功能性片段或變體，所述其功能性片段或變體在至少50個氨基酸殘基上與SEQ?ID?NO：1至18的任意一個具有至少75％的序列同一性。

8.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述重組酶由在SEQ?ID?NO：19至35的任意一個中所定義的核酸序列或其功能性片段或變體編碼，所述其功能性片段或變體在至少50個核苷酸殘基上與SEQ?ID?NO：19至35的任意一個具有至少75％的序列同一性。

9.根據前述權利要求中任一項所述的方法，還包括裂解所述宿主細胞和從所述裂解物回收所述重組酶。

10.根據權利要求8所述的方法，其中所述宿主細胞暴露于洗滌劑、有機酸、均化和/或熱處理。

11.一種真核表達載體，包含編碼能夠水解葉綠素或葉綠素衍生物的酶的核酸序列，所述序列可操作地連接到適于引導所述酶在真核宿主細胞中的細胞內表達的一個或多個控制序列。

12.根據權利要求10所述的表達載體，包含如在SEQ?ID?NO：19至35的任意一個中所定義的核酸序列或其功能性片段或變體，所述其功能性片段或變體在至少50個核苷酸殘基上與SEQ?ID?NO：19至35的任意一個具有至少75％的序列同一性。

13.一種真核宿主細胞，包含如權利要求10或權利要求11所述的表達載體。

14.根據權利要求12所述的宿主細胞，其為真菌細胞。

15.一種能夠水解葉綠素或葉綠素衍生物的重組酶，其通過如權利要求1至9中任一項所述的方法獲得。

16.根據權利要求14所述的重組酶，其中所述重組酶包含如在SEQ?ID?NO：1至18的任意一個中所定義的多肽序列或其功能性片段或變體，所述其功能性片段或變體在至少50個氨基酸殘基上與SEQ?ID?NO：1至18的任意一個具有至少75％的序列同一性。