[發明專利]一種具有降血糖活性竹葉黃酮提取物的制備方法

有效

• 申請號: 201210594892.3
• 申請日: 2012-12-31
• 公開（公告）號: CN103054038A
• 公開（公告）日: 2013-04-24
• 發明（設計）人: 郭輝;錢俊青;高帥
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: A23L1/30
• 分類號: A23L1/30;A61K36/899;A61P3/10
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;王兵

（一）技術領域

本發明涉及一種具有降血糖活性竹葉黃酮提取物的制備方法。?

（二）背景技術

竹子的醫療作用早已為我國人們所認識，據《本草綱目》記，苦竹、甘竹、淡竹及竹瀝、竹筍等均有不同的藥用價值。竹子中的藥用成分主要是黃酮類成分，竹葉黃酮具有明顯的抗脂質過氧化、清除羥自由基和調節血脂功能及抗過敏、抗炎、抗菌、抗突變、抗腫瘤、抗潰瘍、抗病毒、保護心血管疾病及保肝等生理活性，是一種十分理想的天然生物黃酮新資源。?

（三）發明內容

本發明目的旨在充分利用我國竹葉資源，提供一種具有降血糖活性的高黃酮含量的竹葉提取物制備方法，并應用于食品與保健品中，克服現有技術的不足，具有工藝簡單、操作方便、產品竹葉黃酮含量高、設備投資少、無環境污染的優點。?

本發明采用的技術方案是：?

一種具有降血糖活性高含量竹葉黃酮提取物的制備方法，所述方法按如下步驟進行：?

（1）將新鮮竹葉清洗、烘干后粉碎并過20目篩，獲得竹葉粉末，將竹葉粉末與水以質量比1:7~10混合后，在室溫下攪拌浸泡1~3h，然后升溫至80~100℃下加熱回流浸提0.5~3h，冷卻至30~50℃后過濾，獲得濾液，即竹葉水提物；?

（2）在步驟（1）獲得的竹葉水提物中攪拌加入絮凝劑，在室溫下靜?置2~?6h，然后離心（優選在每分鐘10000轉的條件下，于20℃離心10分鐘），棄去沉淀，獲得上清液a；所述絮凝劑為海藻酸鈉、殼聚糖或羧甲基纖維素；?

（3）將步驟（2）獲得的上清液a減壓濃縮后加入乙醇水溶液使乙醇體積終濃度為70~90%，靜置4~12小時后，離心，獲得上清液b，將上清液b減壓濃縮至濃縮物無乙醇味，獲得浸膏；通常工藝上常選用95%的乙醇在醇沉，濃縮物中無乙醇味通常指乙醇體積濃度低于5%。?

（4）將步驟（3）獲得的浸膏加水配成混合液，再將混合液用萃取劑在50~80℃條件下攪拌30~?90分鐘進行萃取，萃取完全后冷卻至30~40℃，靜置分層，獲得上層萃取液和下層萃余液，將上層萃取液減壓濃縮（優選于旋轉蒸發儀中，在真空度為0.09Mpa，50~60℃條件下減壓濃縮），除去溶劑和水，即得竹葉黃酮粗提液；所述萃取劑由有機溶劑A和有機溶劑B以體積比為1000:1~5混合組成，有機溶劑A為乙酸乙酯或乙酸乙酯與異丙醇以體積比5~9:1的混合溶液；有機溶劑B為乙酸；?

（5）將步驟（4）獲得竹葉黃酮粗提液進行柱層析，以聚乙烯聚吡咯烷酮（PVPP）為吸附劑，以體積濃度70%~80%的乙醇水溶液為洗脫劑，收集含目標組分的洗脫液，將洗脫液減壓濃縮除去水（優選在真空度為0.09Mpa，50~60℃條件下減壓濃縮），獲得竹葉黃酮提取物，再以2BV體積濃度?95%的乙醇水溶液洗脫層析柱來再生聚乙烯聚吡咯烷酮（PVPP）。?

進一步，步驟（2）所述絮凝劑以質量濃度0.1~5%絮凝劑水溶液的形式加入。?

進一步，步驟（2）所述絮凝劑水溶液與竹葉水提物體積比為1~5:1000。?

進一步，步驟（2）所述絮凝劑以質量濃度1%絮凝劑水溶液的形式加入，絮凝劑水溶液與竹葉水提物體積比為2:1000。?

進一步，將步驟（2）獲得的上清液a體積減壓濃縮至步驟（1）獲得的竹葉水提物體積的1/20~1/30倍，加入體積濃度95%乙醇水溶液使乙醇體積終濃度為70~90%（優選80%）。?

進一步，所述混合溶液是將步驟（3）獲得的浸膏加水配成步驟（1）獲得的竹葉水提物體積的1/10~1/8倍。?

進一步，步驟（4）中所述萃取劑由有機溶劑A和有機溶劑B以體積比為1000:2混合組成，有機溶劑A為乙酸乙酯或乙酸乙酯與異丙醇以體積比8:1的混合液；有機溶劑B為乙酸。?

進一步，步驟（4）中所述萃取劑的體積用量與混合液的體積比為2~5:1。?

進一步，步驟（5）中所述柱層析按如下步驟進行：將步驟（4）獲得竹葉黃酮粗提液以0.01~?0.05BV/min（優選0.02BV/min）速度加入裝有聚乙烯聚吡咯烷酮的層析柱，先用2~5BV的蒸餾水洗脫至流出液無色，再以3~5?BV?體積濃度70%~80%（優選75%）的乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液，將洗脫液減壓濃縮除去水，獲得竹葉黃酮提取物。?

進一步，所述步驟（5）中聚乙烯聚吡咯烷酮用量為竹葉粉末質量的1/2。?