[發(fā)明專利]利用游動放線菌制備反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210593725.7
• 申請日: 2012-12-31
• 公開（公告）號: CN103114122A
• 公開（公告）日: 2013-05-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鄭裕國;孫麗慧;王遠(yuǎn)山;王元平
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江工業(yè)大學(xué);揚州天和藥業(yè)有限公司
• 主分類號: C12P41/00
• 分類號: C12P41/00;C12P13/00;C12R1/045
• 代理公司: 杭州天正專利事務(wù)所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;王兵

（一）技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種利用生物催化方法制備反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸的方法，特別涉及一種游動放線菌（Actinoplanes?sp.?）ZJB-08196制備反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸的方法。?

（二）背景技術(shù)

反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸（I）又稱氨甲環(huán)酸、止血環(huán)酸，是一種作用于纖維蛋白溶解酶系統(tǒng)的止血藥，臨床上主要用于急性或慢性、局限性或全身纖維蛋白溶解亢進(jìn)所致的各種出血。也能夠競爭性地抑制酪氨酸與酪氨酸酶結(jié)合，減少黑色素的生成，而被用于黃褐斑的治療。添加于化妝品中能阻斷消弭紫外線照射導(dǎo)致的黑色素惡化的進(jìn)程。加入牙膏可以防止牙齦出血。?

目前反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸的規(guī)模化生產(chǎn)均采用化學(xué)法：?

1.環(huán)己烯法合成反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸的工藝路線（式（1））?

式（1）?

2.對氨甲基苯甲酸法合成反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸的工藝路線（式（2））?

式（2）?

環(huán)己烯法和對氨基苯甲酸法工藝路線中都要先合成順反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸（順式：反式=65:35），所得混合物再在強堿性條件下經(jīng)高溫高壓轉(zhuǎn)化成反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸，轉(zhuǎn)化條件苛刻，轉(zhuǎn)化不徹底，后處理復(fù)雜，成本高，污染大。?

近年來，以生物體或酶為基礎(chǔ)的生物催化技術(shù)因高度的化學(xué)、區(qū)域選擇性、立體選擇性溫和的反應(yīng)條件備受關(guān)注。但目前還沒有利用生物催化技術(shù)制備反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸的報道。生物催化法轉(zhuǎn)化順反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸制備反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸具有反應(yīng)條件溫和、轉(zhuǎn)化徹底、易操作等優(yōu)點，具有良好的工業(yè)應(yīng)用前景。?

（三）發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的是提供一種差向異構(gòu)化順式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸制備反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸的方法，即利用游動放線菌（Actinoplanes?sp.）ZJB-08196制備反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸中的方法。?

本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：?

一種利用游動放線菌ZJB-08196制備反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸的方法，所述的方法以游動放線菌（Actinoplanes?sp.）ZJB-08196經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)后獲得的濕菌體為催化劑，以順反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸為底物，在pH?6.5~8.5的水或緩沖液構(gòu)成的轉(zhuǎn)化體系中進(jìn)行轉(zhuǎn)化反應(yīng)，反應(yīng)完全后，將轉(zhuǎn)化液離心，取上清液即獲得含反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸的反應(yīng)液，將反應(yīng)液分離純化，獲得所述反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸。?

進(jìn)一步，所述轉(zhuǎn)化體系中底物初始濃度為0.2~20?g/L。?

進(jìn)一步，所述轉(zhuǎn)化體系中濕菌體添加量為10~200?g/L，所述濕菌體的含水量為80~90%。?

進(jìn)一步，所述轉(zhuǎn)化反應(yīng)是在20~?40℃下轉(zhuǎn)化反應(yīng)2~48小時，反應(yīng)完全?后，將轉(zhuǎn)化液離心，取上清液即獲得含反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸的反應(yīng)液。?

進(jìn)一步，所述含反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸的反應(yīng)液分離純化的方法為：將反應(yīng)液加入活性炭，煮沸脫色，過濾，濾液濃縮，取濃縮液加入無水乙醇至乙醇體積終濃度95%析晶，冷卻至0℃、過濾，晶體用無水乙醇洗滌、過濾，干燥，獲得所述反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸。?

進(jìn)一步，所述催化劑按如下步驟制備：?

（1）?斜面菌種培養(yǎng)：將游動放線菌ZJB-08196接種于斜面培養(yǎng)基，于20~37?℃下培養(yǎng)至菌落長出，獲得斜面活化菌種；所述斜面培養(yǎng)基終濃度組成為：蔗糖?5~30g/L，蛋白胨1~5?g/L，酪氨酸0.5~2?g/L，K₂HPO₄3H₂O?0.5~2?g/L，KCl?0.5~2?g/L，MgSO₄7H₂O?0.5~2?g/L，F(xiàn)eSO₄7H₂O?0.1~1?g/L?，瓊脂15~20?g/L，溶劑為水，初始pH?6.0~7.5；?