[發明專利]利用游動放線菌制備反式-4-氨甲基-環己烷甲酸的方法

有效

• 申請號: 201210593725.7
• 申請日: 2012-12-31
• 公開（公告）號: CN103114122A
• 公開（公告）日: 2013-05-22
• 發明（設計）人: 鄭裕國;孫麗慧;王遠山;王元平
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學;揚州天和藥業有限公司
• 主分類號: C12P41/00
• 分類號: C12P41/00;C12P13/00;C12R1/045
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;王兵

1.一種利用游動放線菌ZJB-08196制備反式-4-氨甲基-環己烷甲酸的方法，其特征在所述的方法以游動放線菌（Actinoplanes?sp.）ZJB-08196經發酵培養后獲得的濕菌體為催化劑，以順反式-4-氨甲基-環己烷甲酸為底物，在pH?6.5~8.5的水或緩沖液構成的轉化體系中進行轉化反應，反應完全后，將轉化液離心，取上清液即獲得含反式-4-氨甲基-環己烷甲酸的反應液，將反應液分離純化，獲得所述反式-4-氨甲基-環己烷甲酸。

2.如權利要求1所述利用游動放線菌ZJB-08196制備反式-4-氨甲基-環己烷甲酸的方法，其特征在所述轉化體系中底物初始濃度為0.2~20?g/L。

3.如權利要求1所述利用游動放線菌制備反式-4-氨甲基-環己烷甲酸的方法，其特征在所述轉化體系中濕菌體添加量為10~200?g/L，所述濕菌體的含水量為80~90%。

4.如權利要求1所述利用游動放線菌ZJB-08196制備反式-4-氨甲基-環己烷甲酸的方法，其特征在所述轉化反應是在20~?40℃下轉化反應2~48小時，反應完全后，將轉化液離心，取上清液即獲得含反式-4-氨甲基-環己烷甲酸的反應液。

5.如權利要求1所述利用游動放線菌ZJB-08196制備反式-4-氨甲基-環己烷甲酸的方法，其特征在所述反應液分離純化的方法為：將反應液加入活性炭，煮沸脫色，過濾，濾液濃縮，取濃縮液加入無水乙醇至乙醇體積終濃度95%析晶，冷卻、過濾，晶體用無水乙醇洗滌、過濾，干燥，獲得所述反式-4-氨甲基-環己烷甲酸。

6.如權利要求1所述利用游動放線菌ZJB-08196制備反式-4-氨甲基-環己烷甲酸的方法，其特征在所述催化劑按如下步驟制備：

（1）?斜面菌種培養：將游動放線菌ZJB-08196接種于斜面培養基，于20~37?℃下培養至菌落長出，獲得斜面活化菌種；所述斜面培養基終濃度組成為：蔗糖?5~30g/L，蛋白胨1~5?g/L，酪氨酸0.5~2?g/L，K₂HPO₄·3H₂O?0.5~2?g/L，KCl?0.5~2?g/L，MgSO₄·7H₂O?0.5~2?g/L，FeSO₄·7H₂O?0.1~1?g/L?，瓊脂15~20?g/L，溶劑為水，初始pH?6.0~7.5；

（2）種子培養：從斜面活化菌種挑取一接種環接種于種子培養基，在搖床轉速150~250?rpm、20~37℃條件下培養48~60小時，得到種子液；所述的種子培養基的終濃度組成為：玉米淀粉5~20?g/L，黃豆餅粉20~60?g/L，甘油5~20?g/L，碳酸鈣1~5?g/L，CaCl₂?1~10?g/L，K₂HPO₄·3H₂O?0.5~2?g/L，溶劑為水，初始pH?6.0~7.5；

（3）發酵培養：將種子液按照體積比1~15%接入發酵培養基中，在20~37℃、搖床轉速150~250?rpm條件下培養1~7天，取發酵液于4000~12000?rpm離心，棄上清液，收集濕菌體；所述發酵培養基的終濃度組成為：麥芽糖10~120?g/L，葡萄糖10~50?g/L，黃豆餅粉5~25?g/L，碳酸鈣2~10g/L，甘油?1~10?g/L，谷氨酸鈉?2~10?g/L，溶劑為水，初始pH?6.0~7.5。

7.如權利要求1所述利用游動放線菌ZJB-08196制備反式-4-氨甲基-環己烷甲酸的方法，其特征在所述方法按如下步驟進行：將游動放線菌ZJB-08196經發酵培養后獲得的濕菌體和順反式-4-氨甲基-環己烷甲酸混合，用pH?7.0~8.2水或緩沖液構成的轉化體系，在25~37℃下轉化反應2~36h，反應完全后，將轉化液離心，取上清液即獲得含反式-4-氨甲基-環己烷甲酸的反應液，將反應液加入活性炭，煮沸脫色，過濾，濾液濃縮，取濃縮液加入無水乙醇至乙醇體積終濃度為95%析晶，冷卻至0℃、過濾，晶體用無水乙醇洗滌、過濾，干燥，獲得所述反式-4-氨甲基-環己烷甲酸；所述轉化體系中底物初始濃度為0.2~20?g/L，所述轉化體系中濕菌體添加量為10~200?g/L，所述濕菌體的含水量為80~90%。