[發(fā)明專(zhuān)利]利用游動(dòng)放線菌制備反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210593725.7
• 申請(qǐng)日: 2012-12-31
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103114122A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-05-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄭裕國(guó);孫麗慧;王遠(yuǎn)山;王元平
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 浙江工業(yè)大學(xué);揚(yáng)州天和藥業(yè)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12P41/00
• 分類(lèi)號(hào): C12P41/00;C12P13/00;C12R1/045
• 代理公司: 杭州天正專(zhuān)利事務(wù)所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;王兵

1.一種利用游動(dòng)放線菌ZJB-08196制備反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸的方法，其特征在所述的方法以游動(dòng)放線菌（Actinoplanes?sp.）ZJB-08196經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)后獲得的濕菌體為催化劑，以順?lè)词?4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸為底物，在pH?6.5~8.5的水或緩沖液構(gòu)成的轉(zhuǎn)化體系中進(jìn)行轉(zhuǎn)化反應(yīng)，反應(yīng)完全后，將轉(zhuǎn)化液離心，取上清液即獲得含反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸的反應(yīng)液，將反應(yīng)液分離純化，獲得所述反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸。

2.如權(quán)利要求1所述利用游動(dòng)放線菌ZJB-08196制備反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸的方法，其特征在所述轉(zhuǎn)化體系中底物初始濃度為0.2~20?g/L。

3.如權(quán)利要求1所述利用游動(dòng)放線菌制備反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸的方法，其特征在所述轉(zhuǎn)化體系中濕菌體添加量為10~200?g/L，所述濕菌體的含水量為80~90%。

4.如權(quán)利要求1所述利用游動(dòng)放線菌ZJB-08196制備反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸的方法，其特征在所述轉(zhuǎn)化反應(yīng)是在20~?40℃下轉(zhuǎn)化反應(yīng)2~48小時(shí)，反應(yīng)完全后，將轉(zhuǎn)化液離心，取上清液即獲得含反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸的反應(yīng)液。

5.如權(quán)利要求1所述利用游動(dòng)放線菌ZJB-08196制備反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸的方法，其特征在所述反應(yīng)液分離純化的方法為：將反應(yīng)液加入活性炭，煮沸脫色，過(guò)濾，濾液濃縮，取濃縮液加入無(wú)水乙醇至乙醇體積終濃度95%析晶，冷卻、過(guò)濾，晶體用無(wú)水乙醇洗滌、過(guò)濾，干燥，獲得所述反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸。

6.如權(quán)利要求1所述利用游動(dòng)放線菌ZJB-08196制備反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸的方法，其特征在所述催化劑按如下步驟制備：

（1）?斜面菌種培養(yǎng)：將游動(dòng)放線菌ZJB-08196接種于斜面培養(yǎng)基，于20~37?℃下培養(yǎng)至菌落長(zhǎng)出，獲得斜面活化菌種；所述斜面培養(yǎng)基終濃度組成為：蔗糖?5~30g/L，蛋白胨1~5?g/L，酪氨酸0.5~2?g/L，K₂HPO₄·3H₂O?0.5~2?g/L，KCl?0.5~2?g/L，MgSO₄·7H₂O?0.5~2?g/L，F(xiàn)eSO₄·7H₂O?0.1~1?g/L?，瓊脂15~20?g/L，溶劑為水，初始pH?6.0~7.5；

（2）種子培養(yǎng)：從斜面活化菌種挑取一接種環(huán)接種于種子培養(yǎng)基，在搖床轉(zhuǎn)速150~250?rpm、20~37℃條件下培養(yǎng)48~60小時(shí)，得到種子液；所述的種子培養(yǎng)基的終濃度組成為：玉米淀粉5~20?g/L，黃豆餅粉20~60?g/L，甘油5~20?g/L，碳酸鈣1~5?g/L，CaCl₂?1~10?g/L，K₂HPO₄·3H₂O?0.5~2?g/L，溶劑為水，初始pH?6.0~7.5；

（3）發(fā)酵培養(yǎng)：將種子液按照體積比1~15%接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，在20~37℃、搖床轉(zhuǎn)速150~250?rpm條件下培養(yǎng)1~7天，取發(fā)酵液于4000~12000?rpm離心，棄上清液，收集濕菌體；所述發(fā)酵培養(yǎng)基的終濃度組成為：麥芽糖10~120?g/L，葡萄糖10~50?g/L，黃豆餅粉5~25?g/L，碳酸鈣2~10g/L，甘油?1~10?g/L，谷氨酸鈉?2~10?g/L，溶劑為水，初始pH?6.0~7.5。

7.如權(quán)利要求1所述利用游動(dòng)放線菌ZJB-08196制備反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸的方法，其特征在所述方法按如下步驟進(jìn)行：將游動(dòng)放線菌ZJB-08196經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)后獲得的濕菌體和順?lè)词?4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸混合，用pH?7.0~8.2水或緩沖液構(gòu)成的轉(zhuǎn)化體系，在25~37℃下轉(zhuǎn)化反應(yīng)2~36h，反應(yīng)完全后，將轉(zhuǎn)化液離心，取上清液即獲得含反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸的反應(yīng)液，將反應(yīng)液加入活性炭，煮沸脫色，過(guò)濾，濾液濃縮，取濃縮液加入無(wú)水乙醇至乙醇體積終濃度為95%析晶，冷卻至0℃、過(guò)濾，晶體用無(wú)水乙醇洗滌、過(guò)濾，干燥，獲得所述反式-4-氨甲基-環(huán)己烷甲酸；所述轉(zhuǎn)化體系中底物初始濃度為0.2~20?g/L，所述轉(zhuǎn)化體系中濕菌體添加量為10~200?g/L，所述濕菌體的含水量為80~90%。