[發明專利]一種重組甘露聚糖酶及其基因工程菌和水解制備甘露寡糖的方法

有效

• 申請號: 201210591856.1
• 申請日: 2012-12-29
• 公開（公告）號: CN103146724A
• 公開（公告）日: 2013-06-12
• 發明（設計）人: 馬立新;趙西選;喻詩;李曄星;王亞平;姚永蘭
• 申請（專利權）人: 湖北大學;湖北花果山實業有限公司
• 主分類號: C12N15/56
• 分類號: C12N15/56;C12N1/19;C12N15/81;C12N9/42;C12P19/14;C12R1/84
• 代理公司: 武漢金堂專利事務所 42212
• 代理人: 丁齊旭

1.一種重組甘露聚糖酶基因，其特征在于：

優化后的序列為：

atgttgccaa?aggcttctcc?agccccatcc?acttcttcta?gtgccgcctc?tacatctttt?60

gcatctactt?ctggcttgca?gtttactatt?gatggtgaaa?ctggttattt?tgctggtact?120

aactcttact?ggattggttt?tttgactgat?aacgctgatg?ttgatttggt?catgggtcat?180

ttgaagtctt?caggattgaa?gattttgaga?gtttggggtt?ttaacgatgt?cacttctcaa?240

ccatctagtg?gtactgtttg?gtatcaacta?catcaggatg?gcaagtctac?tattaacaca?300

ggtgctgacg?gtttgcagag?attggattac?gttgtcagtt?cagccgaaca?gcacgatatc?360

aaacttatca?taaacttcgt?gaattattgg?acagactacg?gcggcatgtc?tgcatacgtt?420

tctgcttacg?gtggatctgg?tgagactgat?ttttacactt?ctgacactat?gcaaagtgct?480

taccagacct?acattaagac?agttgtcgag?cgttactcta?attcctctgc?tgtttttgct?540

tgggaattgg?ctaacgaacc?aagatgtcct?tcttgcgata?cttcagtcct?atataactgg?600

atcgagaaga?cctctaagtt?catcaagggc?ttggacgccg?atagaatggt?ttgtattggt?660

gacgaaggtt?ttggtttgaa?tattgactcc?gatggttctt?acccatacca?attctctgaa?720

ggtctgaact?ttaccatgaa?cctaggcata?gatactatcg?actttggaac?tctgcacttg?780

tatccagatt?catggggtac?gtctgatgat?tggggtaatg?gctggatcac?cgctcatgga?840

gccgcctgca?aggcagctgg?taaaccttgt?ttgttggagg?aatacggtgt?aacatctaat?900

cactgttctg?tggaaggttc?ttggcagaag?actgctttgt?ctaccactgg?tgtgggagct?960

gatttgtttt?ggcagtacgg?agacgatttg?agtactggaa?agtctcccga?tgatggtaac?1020

acaatttact?acggtacttc?cgactatcag?tgcttggtta?cagatcatgt?tgcagctatc?1080

ggttctgct?1089

設計的引物序列為：

man-1GTCAATGTTGCCAAAGGCTTCTCCAGCCCCATCCACTTCTTCTAG

man-2TAGATGCAAAAGATGTAGAGGCGGCACTAGAAGAAGTGGATGGGGC?46

man-3GCCTCTACATCTTTTGCATCTACTTCTGGCTTGCAGTTTACTATTG?46

man-4CAGCAAAATAACCAGTTTCACCATCAATAGTAAACTGCAAGCCAGA?46

man-5GGTGAAACTGGTTATTTTGCTGGTACTAACTCTTACTGGATTGGTT?46

man-6ACATCAGCGTTATCAGTCAAAAAACCAATCCAGTAAGAGTTAGTAC?46

man-7TTTTGACTGATAACGCTGATGTTGATTTGGTCATGGGTCATTTGAA?46

man-8TCTCAAAATCTTCAATCCTGAAGACTTCAAATGACCCATGACCAAA?46

man-9TCTTCAGGATTGAAGATTTTGAGAGTTTGGGGTTTTAACGATGTCA?46

man-10ACAGTACCACTAGATGGTTGAGAAGTGACATCGTTAAAACCCCAAA?46

man-11TCAACCATCTAGTGGTACTGTTTGGTATCAACTACATCAGGATGGC?46

man-12AGCACCTGTGTTAATAGTAGACTTGCCATCCTGATGTAGTTGATAC?46

man-13AGTCTACTATTAACACAGGTGCTGACGGTTTGCAGAGATTGGATTA?46

man-14GTGCTGTTCGGCTGAACTGACAACGTAATCCAATCTCTGCAAACCG?46

man-15ACTTCAGCCCAACAGCACCATATCAAACTTATCATAAACTTCCTGA?46

man-16CGCCCTAGTCTCTCCAATAATTCACGAAGTTTATCATAAGTTTGAT?46

man-17TATTCGACAGACTACGGCGGCATGTCTGCATACGTTTCTGCTTACG?46

man-18TAAAAATCAGTCTCACCAGATCCACCGTAAGCAGAAACGTATGCAG?46

man-19GGATCTGGTGAGACTGATTTTTACACTTCTGACACTATGCAAAGTG?46

man-20CTGTCTTAATGTACGTCTGCTAAGCACTTTGCATAGTGTCAGAAGT?46

man-21CTTACCAGACCTACATTAAGACAGTTGTCGAGCGTTACTCTAATTC?46

man-22AATTCCCAAGCAAAAACAGCAGAGGAATTAGAGTAACGCTCGACAA?46

man-23TGCTGTTTTTGCTTGGGAATTGGCTAACGAACCAAGATGTCCTTCT?46

man-24AGTTATATAGGACTGAAGTATCGCAAGAAGGACATCTTGGTTCGTT?46

man-25CCCATACTTCACTCCTATATAACTGCATCGAGAAGACCTCTAAGTT?46

man-26CTATCCGCGTCCAAGCCCTTGATGAACTTAGACGTCTTCTCGATCC?46

man-27GGCTTCGACGCCGATAGAATGGTTTGTATTGGTGACGAAGGTTTTG?46

man-28AACCATCGGAGTCAATATTCAAACCAAAACCTTCGTCACCAATACA?46

man-29TTTGAATATTGACTCCGATGGTTCTTACCCATACCAATTCTCTGAA?46

man-30ACGTTCATGCTAAAGTTCACACCTTCAGAGAATTCGTATGCGTAAG?46

man-31GTCTGAACTTTACCATGAACCTAGGCATAGATACTATCGACTTTGG?46

man-32AATCTCGATACAAGTGCAGAGTTCCAAAGTCGATAGTATCTATGCC?46

man-33ACTCTGCACTTGTATCCAGATTCATGGGGTACGTCTGATGATTGGG?46

man-34TCCATGAGCGGTGATCCAGCCATTACCCCAATCATCAGACGTACCC?46

man-35TCCATCACCCCTCATGGAGCCGCCTCCAACGCAGCTCGTAAACCTT?46

man-36ATGTTACACCGTATTCCTCCAACAAACAAGGTTTACCAGCTGCCTT?46

man-37TGGAGGAATACGGTGTAACATCTAATCACTGTTCTGTGGAAGGTTC?46

man-38TGGTAGACAAAGCAGTCTTCTGCCAAGAACCTTCCACAGAACAGTG?46

man-39AGAAGACTGCTTTGTCTACCACTGGTGTGGGAGCTGATTTGTTTTG?46

man-40AGTACTCAAATCGTCTCCGTACTGCCAAAACAAATCAGCTCCCACA?46

man-41TACGGAGACGATTTGAGTACTGGAAAGTCTCCCGATGATGGTAACA?46

man-42ATAGTCGGAAGTACCGTAGTAAATTGTGTTACCATCATCGGGAGAC?46

man-43TTTACTACGGTACTTCCGACTATCAGTGCTTGGTTACAGATCATGT?46

man-44AGCAGAACCGATAGCTGCAACATGATCTGTAACCAAGCAC

man-45GGCCATTAATGGTGATGGTGATGGTGAGCAGAACCGATAGCTGCAACAT

利用套疊PCR的方法合成該重組β-甘露聚糖酶基因，設計的引物長度為40-50bp，相鄰兩引物之間有20bp左右重疊序列，Tm值為55-60℃。