[發明專利]微型高效萊克多巴胺免疫親和純化富集柱制備及應用

有效

• 申請號: 201210589314.0
• 申請日: 2012-12-31
• 公開（公告）號: CN103100237A
• 公開（公告）日: 2013-05-15
• 發明（設計）人: 謝體三;李軍;寧歡歡;潘麗金;葉云峰;韋良云;蕭浩
• 申請（專利權）人: 南寧市藍光生物技術有限公司;廣西壯族自治區獸藥監察所
• 主分類號: B01D15/22
• 分類號: B01D15/22;G01N1/34
• 代理公司: 廣西南寧明智專利商標代理有限責任公司 45106
• 代理人: 黎明天

1.一種微型高效萊克多巴胺免疫親和純化富集柱的制備，其特征在于：????

1）將經免疫親和純化的萊克多巴胺特異性多克隆抗體和過碘酸活化的瓊脂糖混勻，在搖床上室溫反應30?分鐘，然后在4℃冰箱靜置30分鐘后加入硼氫化鈉還原，用蒸餾水清洗未結合的抗體，用磷酸緩沖液清洗填料，10倍填料體積/次，洗4次，滴干磷酸緩沖液后加入等體積甘油，混勻，得到萊克多巴胺免疫親和填料；?

2）在特制的塑料柱內下端裝上過濾膜，將萊克多巴胺免疫親和填料裝入柱中，25μL/柱，填料上層蓋上過濾膜，即得所述的萊克多巴胺免疫親和純化富集柱。

2.根據權利要求1所述的方法制備的萊克多巴胺免疫親和純化富集柱，包括偶聯有免疫親和純化的萊克多巴胺特異性多克隆抗體的瓊脂糖填料及裝載該填料的特制塑料柱。

3.根據權利要求1所述的萊克多巴胺免疫親和純化富集柱的制備，其特征在于：所述的免疫親和純化的萊克多巴胺特異性多克隆抗體是用萊克多巴胺與溴乙酰氯反應得到衍生物萊克多巴胺溴乙酰酯溶液，用反向高效液相色譜HPLC純化該溶液得到純化后的萊克多巴胺溴乙酰酯，將純化后的萊克多巴胺溴乙酰酯與載體蛋白偶聯，得到的偶聯物作為免疫原免疫動物，得到抗血清，同時用該純化后的萊克多巴胺溴乙酰酯與經活化的瓊脂糖反應制備純化抗體用的免疫親和柱，用該親和柱一步提取抗血清得到萊克多巴胺特異性多克隆抗體。

4.根據權利要求3所述的萊克多巴胺免疫親和純化富集柱的制備，其特征在于：所述的萊克多巴胺溴乙酰酯是將萊克多巴胺標準品在三乙胺催化下與溴乙酰氯反應得到衍生物萊克多巴胺溴乙酰酯溶液。

5.將此萊克多巴胺溴乙酰氯酯溶液用制備型高效液相色譜儀反向柱色譜分離純化出相對于萊克多巴胺標準品峰后移，且具有萊克多巴胺紫外光吸收光譜特征的單一主峰組分，收集該主峰組分得到純化的萊克多巴胺溴乙酰酯。

6.根據權利要求3所述的萊克多巴胺免疫親和純化富集柱的制備，其特征在于：所述的萊克多巴胺溴乙酰酯是將萊克多巴胺標準品在三乙胺催化下與溴乙酰氯反應得到衍生物萊克多巴胺溴乙酰酯溶液。

7.將此萊克多巴胺溴乙酰氯酯溶液用制備型高效液相色譜儀反向柱色譜分離純化出相對于萊克多巴胺標準品峰后移，且具有萊克多巴胺紫外光吸收光譜特征的單一主峰組分，收集該主峰組分得到純化的萊克多巴胺溴乙酰酯。

8.根據權利要求3所述的萊克多巴胺免疫親和純化富集柱的制備，其特征在于：所述的用純化后的萊克多巴胺溴乙酰酯與經活化的瓊脂糖反應制備純化抗體用的免疫親和柱，是將經活化的瓊脂糖與賴氨酸反應得到氨基化的瓊脂糖，再將氨基化的瓊脂糖與NHS-碘乙酸反應后，再用DTT還原，得到巰基化的瓊脂糖，將巰基化的瓊脂糖和萊克多巴胺溴乙酰酯快速混勻，室溫反應60分鐘，得到化學共價鍵復合體萊克多巴胺溴乙酰-瓊脂糖填料，將填料裝柱，洗去多余的DTT，得到提純萊克多巴胺特異性抗體用的免疫親和柱。

9.根據權利要求1或2所述的萊克多巴胺免疫親和純化富集柱和萊克多巴胺膠體金試紙條聯用。