[發明專利]一種柱轉換測定尿液中CEMA和HEMA含量的方法

無效

• 申請號: 201210588194.2
• 申請日: 2012-12-29
• 公開（公告）號: CN103063776A
• 公開（公告）日: 2013-04-24
• 發明（設計）人: 侯宏衛;張小濤;田永峰;劉彤;陳歡;韓書磊;胡清源
• 申請（專利權）人: 國家煙草質量監督檢驗中心
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 鄭州中民專利代理有限公司 41110
• 代理人: 姜振東

1.一種柱轉換測定尿液中CEMA和HEMA含量的方法，其特征在于：

包括以下工藝步驟：

a、收集志愿者尿液；

b、樣品前處理：尿液在室溫下解凍，混合均勻，準確移取0.5?mL的尿液，加入20?μL的甲酸和10?μL混合內標，加入470?μL的50?mM的甲酸銨水溶液（甲酸調節到pH=2.5），混勻后在10000?rpm的條件下離心5?min，取上清液過0.22?μm的聚醚砜水相濾膜，進LC-MS/MS分析；

c、標準工作液的配制：用甲醇配制不同濃度的CEMA和HEMA標準工作溶液；

d、液相色譜-串聯質譜（LC-MS/MS）測定，吸取配制好的不同濃度的CEMA和HEMA標準工作溶液，注入LC-MS/MS系統，CEMA的線性回歸方程為y?=0.0372x?+0.0489,?HEMA的線性回歸方程為y?=?0.0291x?+?0.0144，其中Y代表分析物與內標峰面積的比值，X表示尿液中目標分析物的濃度，相關系數大于0.999，對樣品待測液進行測定，測得分析物與內標峰面積的比值，代入一元線性回歸方程，求得樣品待測液中分析物的含量。

2.根據權利要求1所述的柱轉換測定尿液中CEMA和HEMA含量的方法，其特征在于：混合內標為氘代內標，氘代內標濃度為1?μg/mL。

3.根據權利要求1所述的柱轉換測定尿液中CEMA和HEMA含量的方法，其特征在于：在LC-MS/MS測定中，選取限進色譜材料色譜柱LiChrospher??RP-8?ADS?24×4?mm（25?μm）和Agilent?Zorbax?Eclipse?Plus?C18?（2.1×150?mm,?3.5?μm）色譜柱，流動相A：0.1%?甲酸水溶液，流動相B：乙腈；采用梯度洗脫，分析時間為25?min，進樣量為2?μL。

4.根據權利要求3述的柱轉換測定尿液中CEMA和HEMA含量的方法，其特征在于：梯度洗脫條件如表1：

表1?梯度洗脫以及柱切換條件

?。

5.根據權利要求1所述的柱轉換測定尿液中CEMA和HEMA的方法，其特征在于：串聯質譜檢測器的條件：電噴霧離子源，多反應監測負離子掃描方式；噴霧電壓（IS）：-4400V，霧化氣（Gas1）：55?psi，氣簾氣壓力（CUR）：35?psi，輔助霧化氣（Gas2）：50?psi，離子源溫度（TEM）：530?°C，進口電壓（EP）：-10?V，出口電壓（CXP）：-10?V，駐留時間：100?ms。