[發明專利]重組人IFN-β-1a及其生產和純化方法

有效

• 申請號: 201210587363.0
• 申請日: 2012-12-28
• 公開（公告）號: CN103898123B
• 公開（公告）日: 2019-03-15
• 發明（設計）人: 宋楠萌;涂祁鵬;杜伯雨;張磊;薛劍峰;劉家望;趙娟;金孟燮
• 申請（專利權）人: 北京韓美藥品有限公司
• 主分類號: C12N15/22
• 分類號: C12N15/22;C12N15/63;C12N5/10;C12P21/02;C07K1/22;C07K1/18;C07K1/16;C12R1/91
• 代理公司: 隆天知識產權代理有限公司 72003
• 代理人: 王芝艷;吳小瑛

本發明提供了編碼重組人IFN?β?1a的核酸序列，包含該核酸序列的表達質粒和轉染有該質粒的穩定細胞系以及利用該細胞系大規模生產重組人IFN?β?1a的發酵方法。使用所述發酵方法生產重組人IFN?β?1a的產量可達60.52mg/L，比活為282,000MIU/mg。此外，本發明還提供了從穩定細胞系獲得高純度的人重組IFN?β?1a的的純化方法，純化后的重組人重組IFN?β?1a蛋白的純度在98%以上，且具有同市售商品化人重組IFN?β?1a相當的體外活性。相對于以往的純化方法，本發明的純化方法保持了蛋白樣品的活性，簡化了后續的純化步驟，并可以獲得更高的產率，更適于工業的大規模生產。

技術領域

本發明屬于生物制品技術領域，涉及一種重組人IFN-β-1a穩定細胞系的構建、重組人IFN-β-1a的大規模生產及其純化。

背景技術

1957年，英國病毒生物學家Alick Isaacs和瑞士研究人員Jean Lindenmann在利用雞胚絨毛尿囊膜研究流感干擾現象時了解到，病毒感染的細胞能產生一種因子，后者作用于其他細胞，干擾病毒的復制，故將其命名為干擾素（IFN）。1966-1971年，Friedman發現了干擾素的抗病毒機制，引起了人們對干擾素抗病毒作用的關注。而后，干擾素的免疫調控及抗病毒作用、抗增殖作用以及抗腫瘤作用逐漸被人們認識（A.Yabrov.MedicalHypotheses,Vol5,Issue7:769-797,Ion Bresser.Biochimie,Vol89,Issue6-7:723-728）。

目前在人類身上共發現α、β、γ三種類型的干擾素：α型干擾素（IFN-α）是由白細胞產生的（Wolf Peter Hofmann et.Al,Journal of Clinical Virology，Vol32,Issue2:86-91）；β型干擾素（IFN-β）是由成纖維細胞（纖維母細胞）產生的；γ型干擾素是（IFN-γ）由免疫系統中的T細胞和自然殺傷細胞產生的（Alfons Billiau et.al,Cytokin&GrowthFactor Reviews,Vol20,Issue2,97-113）。人干擾素β（β型人干擾素）是一種天然的可溶糖蛋白。有廣泛的生物學活性，如抗病毒、抗增殖及免疫調節作用（Robert J.Fox,TREND inImmunology，Vol25,No.12:632-636）。

多發性硬化癥（Multiple Sclerosis）是中樞神經系統和免疫有關的發炎及去髓鞘（demyelinatin）疾病。可引起各種癥狀，包括感覺改變、視覺障礙、肌肉無力、憂郁、協調與講話困難、嚴重的疲勞、認知障礙、平衡障礙、體熱和疼痛等，嚴重的可以導致活動性障礙和殘疾。歐美地區為該疾病的高發區，是年輕人除了外傷之外導致神經障礙最常見的疾病（G.Rosati,Neurol Sci（2001）22:117-139）。近年來，隨著診斷水平的提高以及對該病認識程度的增加，亞洲國家如日本、中國等，多發性硬化癥的發病率呈現上升趨勢（吉良潤一，中華神經科雜志，2009年6月，第42卷，第6期，422-424）。由于我國人口基數巨大，因此國內市場對于有效藥物的需求龐大。