[發明專利]一種采用碲化鎘量子點清除帕金森模式細胞中產生的α-核突觸蛋白的方法及其應用

有效

• 申請號: 201210586127.7
• 申請日: 2012-12-28
• 公開（公告）號: CN103013922A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發明（設計）人: 黃慶;陳楠;李曉明;魏敏;樊春海
• 申請（專利權）人: 中國科學院上海應用物理研究所
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;A61K33/24;A61P25/16
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 鄧琪

技術領域

本發明屬于生物納米材料領域，具體涉及一種采用碲化鎘量子點清除帕金森模式細胞中產生的α-核突觸蛋白的方法及其應用。?

背景技術

帕金森癥（Parkinson’s?disease，PD）是一種最常見的神經退行性疾病，在全世界40歲以上的人口中,有超過0.1%的人受到該疾病的影響。在臨床上多數病人在表現為活動失調及靜止時不自主的顫抖，心情煩躁、抑郁或精神異常，給社會和病人家庭帶來了極大的經濟與精神負擔，因而對此疾病的研究也越來越受到人們的重視。帕金森癥在病理學表現為患者大腦黑質致密部多巴胺神經元的喪失，路易包涵體增多。而路易體主要是由一些稱為α-核突觸蛋白錯誤折疊和聚集形成的淀粉樣蛋白質纖維組成，另外這種錯誤折疊的蛋白在體內積累也對多巴胺神經元有很大的毒性，促使其凋亡。進一步研究發現α-核突觸蛋白的過表達和錯誤折疊在帕金森癥形成過程中具有重要作用。?

很多研究發現細胞自噬可以幫助神經元細胞清除具有細胞毒性的異常蛋白質的積累的作用，而細胞自噬是一種廣泛存在于真核細胞內的溶酶體依賴性的降解途徑,與人體生理過程和疾病有著密切的關系，例如腫瘤、神經變性、微生物感染和老化均與自噬的功能失調有關。目前，已有多種納米材料被報道可以誘導細胞產生自噬。其中，不同類型的量子點也被Nano?Lett和Angew?Chem雜志報道可以使細胞發生自噬。?

而α-核突觸蛋白的異常積聚又與其降解通路的障礙有關，自噬的激活不僅可以降低聚集體的形成，而且可以明顯改善其行為表現。然而以往對α-核突觸蛋白降解的研究主要集中在泛素化降解途徑，只是近幾年的報道顯示，自噬也參與了α-核突觸蛋白的降解，并發揮更重要的角色。因而，通過調控?自噬進而促進α-核突觸蛋白的清除成為延緩帕金森疾病進展的一個潛在治療靶點。但是，直到目前為止，都還未曾出現通過有效引發帕金森模式細胞的自噬進而清除細胞內有毒的α-核突觸蛋白的研究。?

發明內容

本發明旨在提供一種采用碲化鎘量子點清除帕金森模式細胞中產生的α-核突觸蛋白的方法及其應用。?

本發明涉及一種采用碲化鎘量子點清除帕金森模式細胞中產生的α-核突觸蛋白的方法，包括：將帕金森模式細胞消化獲得的細胞懸液按每孔3×10⁴~3×10⁵個鋪6孔板，待細胞貼壁后吸掉孔內培養基，并向其中加入含有4-75nM碲化鎘量子點的培養基，所述帕金森模式細胞中過量表達的α-核突觸蛋白在所述碲化鎘量子點的作用下得到明顯清除；其中，所述帕金森模式細胞是使用1-甲基-4-苯基-吡啶離子在體外構建并使用全反式維甲酸和十四烷酰佛波醇乙酸酯誘導分化的SH-SY5Y細胞或使用1-甲基-4-苯基-吡啶離子在體外構建的分化的PC12細胞。?

所述碲化鎘量子點的濃度優選為4-18nM。?

所述碲化鎘量子點的濃度優選為4nM。?

所述SH-SY5Y細胞的帕金森模式細胞的構建方法包括：1）細胞分化：將所述SH-SY5Y細胞在含有0.01mM全反式維甲酸（ATRA）的培養基中培養2~3天后，換含80nM十四烷酰佛波醇乙酸酯（TPA）的培養基繼續培養2~3天，然后換不含有分化劑的培養基培養1~2天；2）細胞鋪板：待分化細胞長滿后消化獲得細胞懸液，進行細胞計數，按每孔3×10⁴~3×10⁵個鋪6孔板；3）加藥處理：待6孔板內細胞貼壁后，吸掉孔內培養基，加入0.5-50mM1-甲基-4-苯基-吡啶離子（MPP⁺）的培養稀釋液，孵育60~72小時。?

其中，所述步驟3）中1-甲基-4-苯基-吡啶離子的濃度優選為1mM。?

所述PC12細胞的帕金森模式細胞的構建方法包括：1）細胞鋪板：將所述PC12細胞消化獲得的細胞懸液進行細胞計數，按每孔3×10⁴~3×10⁵個細胞鋪6孔板；2）加藥處理：待6孔板內細胞貼壁后，吸掉孔內培養基，加入0.5-50mMmM1-甲基-4-苯基-吡啶離子（MPP⁺）的培養稀釋液2ml，孵育36~48小時。?

其中，所述步驟2）中MPP⁺的濃度優選為5mM。?

所述碲化鎘量子點的粒徑為3-5nm。?

所述碲化鎘量子點由微波法合成。?

本發明還提供一種碲化鎘量子點作為制備治療帕金森癥藥物的應用。?

所述碲化鎘量子點的粒徑為3-5nm。?