[發明專利]含Fc融合蛋白的酵母表達載體及其構建方法無效
| 申請號： | 201210584662.9 | 申請日： | 2012-12-28 |
| 公開（公告）號： | CN103898154A | 公開（公告）日： | 2014-07-02 |
| 發明（設計）人： | 萬曉春;呂衛東;王蒲;向軍儉 | 申請（專利權）人： | 深圳先進技術研究院 |
| 主分類號： | C12N15/81 | 分類號： | C12N15/81;C12N15/66 |
| 代理公司： | 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224 | 代理人： | 吳平 |
| 地址： | 518055 廣東省深圳*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | fc 融合 蛋白 酵母 表達 載體 及其 構建 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種含Fc融合蛋白的酵母表達載體的構建方法，其特征在于，包括如下步驟：
（1）制備Fc基因片段，所述Fc基因片段的堿基組成如SEQ?ID?NO.3所示；
（2）將步驟（1）所得的Fc基因片段連接到pMD18-T載體中，得連接產物pMD18T-Fc；
（3）構建表達載體：將步驟（2）所得的連接產物pMD18T-Fc和表達載體pPICZαA經EcoRⅠ、NotⅠ雙酶切，并利用T4DNA連接酶連接，得含Fc融合蛋白的酵母表達載體pPICZαA-Fc。
2.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于，步驟（1）所述的制備Fc基因片段的制備方法為：以人IgG1的重鏈恒定區為模板，用引物擴增，得Fc基因片段。
3.根據權利要求2所述的構建方法，其特征在于，所述的引物為：
上游引物：GAATTCGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACT，
下游引物：GCGGCCGCTCATTTACCCGGAGACAGGGAGAGGCTC。
4.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于，步驟（2）所述的連接為：于21-23℃連接0.9-1.1h。
5.根據權利要求1-4任一項所述的構建方法制得一種含Fc融合蛋白的酵母表達載體。
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