[發明專利]一種利用多重PCR技術分析花生粕中黃曲霉毒素B1產生趨勢的方法

無效

• 申請號: 201210584285.9
• 申請日: 2012-12-31
• 公開（公告）號: CN103103258A
• 公開（公告）日: 2013-05-15
• 發明（設計）人: 陸健;李恒嚴;蔡國林;李秋;朱德偉;任曉靜
• 申請（專利權）人: 山東魯花集團有限公司;江南大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12R1/67
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于微生物與分子生物學應用領域，尤其涉及一種利用多重PCR技術分析花生粕中黃曲霉毒素B₁產生趨勢的方法。

背景技術

花生粕極易感染黃曲霉和寄生曲霉等微生物，在一定溫度與濕度條件下產生黃曲霉毒素。而黃曲霉毒素是目前發現的污染農產品中毒性最強的一類生物毒素，具有極強的致癌、致突變和致畸性；尤其是黃曲霉毒素B₁，毒性分別是氰化鉀和砒霜的10倍和68倍；黃曲霉毒素的污染，已經成為很多農產品規模應用的瓶頸與人畜生命安全的潛在威脅。

目前黃曲霉菌毒素B₁產生菌的鑒定十分困難，主要采用傳統的形態學方法，通過光學顯微鏡觀察微生物的形態特征以及平板單菌落的形態學分析，但是這兩種方法都很難將黃曲霉毒素B₁產生菌與其他非產黃曲霉毒素霉菌區分開來，盡管檢測黃曲霉和寄生曲霉的傳統方法和分子生物學方法已有許多，但由于花生粕樣品成分復雜，對分子生物學方法的直接應用存在較大干擾，難以實現。

發明內容

本發明的目的在于改進已有技術的不足而提供一種具有特異性高、能夠快速鑒定花生粕中是否感染黃曲霉毒素B₁產生菌、檢測花生粕的黃曲霉毒素B₁產生的趨勢的方法。

本發明的目的是這樣實現的，一種利用多重PCR技術分析花生粕中黃曲霉毒素B₁產生趨勢的方法，其特征在于提取樣品花生粕的基因組DNA后，通過多重PCR擴增黃曲霉毒素B₁合成基因，通過PCR結果判斷花生粕產生黃曲霉毒素B₁的趨勢，用于指導花生粕的儲藏和運輸條件控制。

為了進一步實現本發明的目的，可以是所述樣品花生粕采用縮分法取樣，最終樣品的重量為0.1g。

為了進一步實現本發明的目的，可以是該方法包括以下步驟：

（1）將花生粕進行液氮研磨預處理，用土壤DNA抽提試劑盒提取花生粕基因組DNA，得到的粗DNA用核酸蛋白定量儀檢測后存于﹣20℃備用；

????（2）以提取的DNA為模板，用4組引物進行PCR擴增，得到PCR產物，所述4組引物為4對引物序列，第一組引物的正向序列如序列表中SEQ?ID?-1F所示，第一組引物反向序列則具有表中SEQ?ID?-1R的堿基序列；第二組正向、反向的序列分別對應于序列表中的SEQ?ID?-2F和SEQ?ID?-2R的堿基序列；第三組正向、反向的序列分別對應于序列表中的SEQ?ID?-3F和SEQ?ID?-3R的堿基序列；第四組正向、反向的序列分別對應于序列表中的SEQ?ID?-4F和SEQ?ID?-4R的堿基序列；