[發(fā)明專(zhuān)利]一種利用多重PCR技術(shù)分析花生粕中黃曲霉毒素B1產(chǎn)生趨勢(shì)的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210584285.9
• 申請(qǐng)日: 2012-12-31
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103103258A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-05-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陸健;李恒嚴(yán);蔡國(guó)林;李秋;朱德偉;任曉靜
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 山東魯花集團(tuán)有限公司;江南大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/68
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/68;C12R1/67
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種利用多重PCR技術(shù)分析花生粕中黃曲霉毒素B₁產(chǎn)生趨勢(shì)的方法，其特征在于提取樣品花生粕的基因組DNA后，通過(guò)多重PCR擴(kuò)增黃曲霉毒素B₁合成基因，通過(guò)PCR結(jié)果判斷花生粕產(chǎn)生黃曲霉毒素B₁的趨勢(shì)，用于指導(dǎo)花生粕的儲(chǔ)藏和運(yùn)輸條件控制。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用多重PCR技術(shù)分析花生粕中黃曲霉毒素B₁產(chǎn)生趨勢(shì)的方法，其特征在于所述樣品花生粕采用縮分法取樣，最終樣品的重量為0.1g。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用多重PCR技術(shù)分析花生粕中黃曲霉毒素B₁產(chǎn)生趨勢(shì)的方法，其特征是該方法包括以下步驟：

（1）將花生粕進(jìn)行液氮研磨預(yù)處理，用土壤DNA抽提試劑盒提取花生粕基因組DNA，得到的粗DNA用核酸蛋白定量?jī)x檢測(cè)后存于﹣20℃?zhèn)溆茫?/p>

（2）以提取的DNA為模板，用4組引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到PCR產(chǎn)物，所述4組引物為4對(duì)引物序列，第一組引物的正向序列如序列表中SEQ?ID?-1F所示，第一組引物反向序列則具有表中SEQ?ID?-1R的堿基序列；第二組正向、反向的序列分別對(duì)應(yīng)于序列表中的SEQ?ID?-2F和SEQ?ID?-2R的堿基序列；第三組正向、反向的序列分別對(duì)應(yīng)于序列表中的SEQ?ID?-3F和SEQ?ID?-3R的堿基序列；第四組正向、反向的序列分別對(duì)應(yīng)于序列表中的SEQ?ID?-4F和SEQ?ID?-4R的堿基序列；

引物名稱序列產(chǎn)物大小序列表中的序列號(hào)aflRFTATCTCCCCCCGGGCATCTCCCGG24SEQ ID -1FaflRRCCGTCAGACAGCCACTCCACACGG24SEQ ID -1Romt-1FGTGGACGGACCTAGTCCGACATCAC25SEQ ID -2Fomt-1RGTCGGCGCCACGCACTGGGTTGGGG25SEQ ID -2Rver-1FGCCGCAGGCCGCGGAGAAAGGTGGT25SEQ ID -3Fver-1RCCGCAGTCAATGGCCATGCAGCG23SEQ ID -3RITSFTCCGTAGGTGAACCTGCGG19SEQ ID -4FITSRTCCTCCGCTTATTGATATGC20SEQ ID -4R

????（3）PCR產(chǎn)物用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，根據(jù)PCR產(chǎn)物電泳條帶的數(shù)目，判定花生粕中是否感染黃曲霉毒素產(chǎn)生菌，其中：

當(dāng)PCR產(chǎn)物有0，1，2,或3個(gè)條帶時(shí)，判定花生粕未感染黃曲霉毒素產(chǎn)生菌；當(dāng)PCR產(chǎn)物有4個(gè)條帶時(shí)，判定花生粕感染了黃曲霉毒素產(chǎn)生菌，根據(jù)條帶的豐度確定黃曲霉毒素產(chǎn)生的趨勢(shì)。