[發明專利]杏皮渣醋醋酸菌及其分離純化方法和應用方法

有效

• 申請號: 201210577182.X
• 申請日: 2012-12-27
• 公開（公告）號: CN103173381A
• 公開（公告）日: 2013-06-26
• 發明（設計）人: 傅力;張富縣
• 申請（專利權）人: 韓山師范學院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02;C12J1/04;C12R1/02;C12R1/865
• 代理公司: 北京鼎佳達知識產權代理事務所(普通合伙) 11348
• 代理人: 蔣常雪

1.一種杏皮渣醋醋酸菌，其特征在于，菌種的名稱為：醋酸桿菌（Acetobacter?pomorum?strain?LMG?18848），屬于醋酸單胞菌屬，命名為Ac11；已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC?No.6938，并有存活證明；

該菌種易在酸性且含酒精的環境中生長，菌落形態為邊緣整齊、表面光滑、乳白色、凸起的圓形菌落，直徑為0.5～1mm；個體形態為短桿狀，呈單、對、堆或鏈狀排列，為革蘭氏陰性菌。

2.如權利要求1所述的杏皮渣醋醋酸菌的分離純化方法，其特征在于，包括下列步驟：

1）醋酸菌的富集培養：

50g杏皮渣加入250ml水中，30℃下培養15d得杏皮渣自然發酵液，取杏皮渣自然發酵液、棗醋和醋醅各10g，分別放入裝有90ml富集培養基的三角瓶中，30℃、110r/min培養3d，得到醋酸菌的富集培養液；

富集培養基的重量組成為：酵母浸粉1%、葡萄糖1%、重量濃度為0.02%的結晶紫0.5%、制霉素（5×10⁵?u）5mg/ml、無水乙醇3%(v/v)、余量為水；

2）醋酸的定性試驗：

取含有醋酸菌的富集培養液10ml以轉速3000r/min，5min離心后，除去醋酸菌等菌體沉淀，吸取5ml無菌體的上清液，以2.5mol/l和0.1mol/l?NaOH溶液中和至pH?7.0，煮沸，加入質量濃度為5%的氯化鐵液5～7滴，如果形成紅褐色沉淀確定有醋酸；

3）醋酸菌平板分離純化：

取醋酸菌富集培養液25ml放入裝有225ml生理鹽水的三角瓶中，依次稀釋至10^-7（ml/ml）分別取250μl10^-6(ml/ml)和10^-7(ml/ml)的稀釋液涂布于3個碳酸鈣平板和3個溴甲酚紫平板，在30℃培養至菌落產生透明圈，挑選鈣溶解圈大的單個菌落采用涂布法進一步純化，分離出單個菌落接種于碳酸鈣分離培養基斜面上，30℃培養2d，得到醋酸菌Ac11,4℃保藏；

碳酸鈣分離培養基的重量組成為：葡萄糖1%、酵母浸粉1%、165℃干熱滅菌30min的碳酸鈣2%、無水乙醇3%(v/v)、瓊脂1.8%、余量為水；

權利要求1所述的杏皮渣醋醋酸菌的應用方法，其特征在于，利用所述的杏皮渣醋醋酸菌制備杏皮渣醋，具體步驟為：

（1）原料預處理：選擇無霉變、黃色干杏皮渣，去除雜物，并用清水將杏皮渣上的泥土、微生物洗凈待用；

（2）制備杏皮渣汁：將洗凈的干杏皮渣放入50℃的溫水中，重量份配比為杏皮渣：溫水為1：5，?浸泡4h，過濾取汁，調整可溶性固形物為18Brix，100℃水浴滅菌5min；

（3）釀酒酵母種子液和產酯酵母種子液的制備：

取斜面保藏的釀酒酵母CGMCC?No.2927（已公開）1環接種至10ml?17Brix杏皮渣汁中，28℃培養24h，得到釀酒酵母種子液；

取斜面保藏的產酯酵母（已公開）2環接種至10ml?17Brix杏皮渣汁中28℃培養36h，得到產酯酵母種子液；

（4）酒精發酵：以3%（v/v）接種量將釀酒酵母種子液和以1.5%（v/v）接種量將產酯酵母種子液接入18Brix杏皮渣汁中，密閉發酵，28℃發酵5d，得杏皮渣酒精發酵液；

（5）?醋酸發酵：取斜面保藏的醋酸桿菌Ac11?1環接種至10ml?3%（v/v）杏皮渣酒精發酵液中，28℃培養24h，得到醋酸桿菌Ac11種子液；

按13%（v/v）的接種量將醋酸菌Ac11種子液接入杏皮渣酒精發酵液，30℃靜止發酵24d；

（6）杏皮渣醋澄清：每100ml杏皮渣醋加入6ml質量濃度為2%的皂土，澄清24h，4500r/min離心5min，收集澄清液，得杏皮渣醋；

（7）成品殺菌：將杏皮渣醋裝瓶加塞，75℃保持3min殺菌。