[發(fā)明專利]糖化血紅蛋白質(zhì)控品的制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210572924.X
• 申請日: 2012-12-26
• 公開（公告）號: CN103076214A
• 公開（公告）日: 2013-05-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鄒炳德;鄒繼華;賈江花;林丹
• 申請（專利權(quán)）人: 寧波美康生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N33/96
• 代理公司: 寧波市鄞州甬致專利代理事務(wù)所(普通合伙) 33228
• 代理人: 代忠炯

1.一種糖化血紅蛋白質(zhì)控品的制備方法，其特征在于：它包括以下制備步驟：

1）先在反應(yīng)液中加入血紅蛋白，使每分升反應(yīng)液中血紅蛋白含量為1-40克，在15-45℃下糖基化反應(yīng)1-10天后，離心除去沉淀，留取上清夜，其中所述反應(yīng)液成分為：

緩沖液：20-200mM，pH?7.0-7.5

氯化鈉：9g/L

葡萄糖：50-200mM

還原劑：20-200mM

金屬螯合劑：0.1-10mM

防腐劑質(zhì)量百分含量：0.1-5%

其中上述溶劑為水；

2）將步驟1）中制備的上清液裝入透析袋，置于4℃透析液中透析至完全除去葡萄糖，離心取上清液，其中所述透析液成分為：

緩沖液：20-200mM，pH?7.0-7.5

氯化鈉：9g/L

還原劑：20-200mM

金屬螯合劑：0.1-10mM

防腐劑質(zhì)量百分含量：0.1-5%

其中上述溶劑為水；

3）將步驟2）中制備的上清液用血紅蛋白稀釋液稀釋至所需質(zhì)控品濃度，加入賦形劑，然后進(jìn)行低溫預(yù)凍、冷凍干燥，制成凍干粉，最后將凍干粉復(fù)溶、分裝即可使用。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的糖化血紅蛋白質(zhì)控品的制備方法，其特征在于：所述血紅蛋白為重組人血紅蛋白。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的糖化血紅蛋白質(zhì)控品的制備方法，其特征在于：所述緩沖液為磷酸鹽緩沖液、三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽緩沖液、乙酸-乙酸鈉緩沖液、鄰苯二甲酸-鹽酸緩沖液、甘氨酸-鹽酸緩沖液、Good’s緩沖液中的一種。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的糖化血紅蛋白質(zhì)控品的制備方法，其特征在于：所述還原劑為磷酸三（β-氯乙基)酯（TCEP）、二硫蘇糖醇（DTT）、β-巰基乙醇、還原型谷胱甘肽、L-半胱氨酸、維生素C中的一種。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的糖化血紅蛋白質(zhì)控品的制備方法，其特征在于：所述金屬螯合劑為乙二胺四乙酸（EDTA）、乙二醇-雙-(2-氨基乙醚)四乙酸（EGTA）中的一種。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的糖化血紅蛋白質(zhì)控品的制備方法，其特征在于：所述防腐劑為苯甲酸鈉、疊氮鈉、山梨酸鉀、2-甲基-4-異噻唑啉-3-酮、proclin300中的一種。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的糖化血紅蛋白質(zhì)控品的制備方法，其特征在于：所述賦形劑由凍干保護劑，填充劑，抗氧化劑，酸堿調(diào)整劑組成，其中各組分以它們加入溶液后的含量計為：凍干保護劑質(zhì)量百分含量0.5-10%，填充劑質(zhì)量百分含量0.5-15%，抗氧化劑摩爾濃度0.1-20mM，酸堿調(diào)整劑摩爾濃度0.05-20mM。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的糖化血紅蛋白質(zhì)控品的制備方法，其特征在于：所述凍干保護劑為甘油、二甲基亞砜（DMSO）、海藻糖、蔗糖、右旋糖酐、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）中的一種；所述填充劑為甘露醇、山梨醇、PEG4000、明膠中的一種；所述抗氧化劑為維生素D、維生素E、硫代硫酸鈉中的一種；所述酸堿調(diào)整劑為乙二胺四乙酸二鈉（EDTA）、甘氨酸、谷氨酸鈉中的一種。