[發明專利]大腸桿菌-梭菌穿梭表達載體及其構建和表達在審
| 申請號： | 201210571635.8 | 申請日： | 2012-12-25 |
| 公開（公告）號： | CN103898098A | 公開（公告）日： | 2014-07-02 |
| 發明（設計）人： | 姚泉洪;田永生;彭日荷;許晶;王波;王麗娟;韓靜 | 申請（專利權）人： | 上海市農業科學院 |
| 主分類號： | C12N15/11 | 分類號： | C12N15/11;C12N15/113;C12N15/74;C12Q1/34 |
| 代理公司： | 上海開祺知識產權代理有限公司 31114 | 代理人： | 費開逵 |
| 地址： | 201106 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 大腸桿菌 穿梭 表達 載體 及其 構建 | ||
【權利要求書】：
1.大腸桿菌lacZ基因，其核苷酸序列如SEQ?IDNo.1所示。
2.梭菌OABC基因的啟動子，其核苷酸序列如SEQ?ID?No.2所示。
3.包含權利要求2所述的梭菌OABC基因的啟動子的pYN7443質粒。
4.大腸桿菌-梭菌穿梭表達載體，其特征在于，是在權利要求3所述的pYN7443質粒的BamHI和SacI酶切位點之間插入權利要求1所述的大腸桿菌lacZ基因編碼的序列構建而成的。
5.權利要求4所述的大腸桿菌-梭菌穿梭表達載體的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：
1）根據梭菌偏愛密碼子合成生物法合成大腸桿菌lacZ基因；
2）構建包含梭菌OABC基因的啟動子的pYN7443質粒；
3）將所述大腸桿菌lacZ基因與pYN7443質粒連接構建大腸桿菌-梭菌穿梭表達載體。
6.權利要求4所述的梭菌穿梭表達載體轉化到梭菌中并測定大腸桿菌lacZ基因活性的方法，其特征在于，包括以下步驟：
1）電擊法轉化梭菌；
2）大腸桿菌lacZ基因的活性測定。
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