[發明專利]一種檢測芳香植物鮮花含油量的方法

有效

• 申請號: 201210570947.7
• 申請日: 2012-12-24
• 公開（公告）號: CN103018226A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發明（設計）人: 汪志平;馬麗芳;于金鑫;劉新穎
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司 33212
• 代理人: 周世駿

1.一種檢測芳香植物鮮花精油含量的方法，其特征在于，該方法是：

先用液氮和石英沙將芳香植物鮮花充分研細，加入蒸餾水和二甲基亞砜后進行超聲處理及加熱回流，使芳香植物鮮花中的精油充分抽提至二甲基亞砜水溶液中，再通過蒸餾方式將精油分離出來，獲得精油與蒸餾水的混合液，并加入二甲基亞砜使其與精油互溶；利用尼羅紅能與芳香植物鮮花精油結合并發出特異波長熒光的特性，在含精油的二甲基亞砜水溶液中加入足量的尼羅紅，于490?nm光子激發下檢測450～700?nm的熒光發射光譜，并獲得被測芳香植物鮮花精油-尼羅紅產物的特征峰（λ_C）及其熒光發射光強度（I）；將所得結果與空白樣本進行比較后，再與油脂標準品——三油酸甘油酯的熒光發射光強度曲線進行比較，通過對應的光強度值得到被測芳香植物鮮花樣品中精油含量。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，具體包括以下步驟：

（1）稱取5～10?g芳香植物鮮花放入陶瓷研缽中，加入石英沙和液氮，并用研杵將芳香植物鮮花研磨成細泥；

（2）將芳香植物鮮花細泥轉至圓底離心管中，加入10?ml蒸餾水和1?ml二甲基亞砜并混勻；在冰浴條件下以超聲波處理60?s；

（3）將超聲波處理后的樣品轉至圓底蒸餾燒瓶中，加入15?ml蒸餾水并搖勻后安裝至冷凝回流器上；置100℃水浴中冷凝回流2?h后，停止加熱繼續通冷卻水，使系統冷卻至室溫；

（4）?卸下帶試樣的圓底蒸餾燒瓶，將其安裝到具冷凝管的蒸餾提取器上，置100℃水浴中蒸餾，冷凝管通冷卻水，用25?ml容量瓶收集餾分，當餾分達20?ml時，停止蒸餾；

（5）在制得的餾分中依次加入二甲基亞砜1?ml和25?μg/mL的尼羅紅溶液1?ml，并用蒸餾水定容至25?ml，充分混勻后于黑暗中40℃染色10?min，再利用熒光分光光度計于490?nm光子激發下檢測450～700?nm的熒光發射光譜，并獲得被測芳香植物鮮花精油-尼羅紅產物的特征峰（λ_C）及其熒光發射光強度（I）；

同時，在20?ml蒸餾水中依次加入二甲基亞砜1?ml和25?μg/mL的尼羅紅溶液1?ml，并用蒸餾水定容至25?ml，充分混勻后于黑暗中40℃染色10?min，進而利用熒光分光光度計于490?nm光子激發下檢測特征波長λ_C處的熒光發射光強度（I_B），以此為對照；

待測芳香植物鮮花中精油的相對熒光強度值I_S=I-I_B；

（6）分別在5只25?ml容量瓶中加入20?ml蒸餾水和1?ml?二甲基亞砜，再分別加入0、2.5、5、7.5、10?mg三油酸甘油酯，混勻后各加入25?μg/mL的尼羅紅溶液1?ml，并分別用蒸餾水定容至25?ml，充分混勻后于黑暗中40℃染色10?min；以未加三油酸甘油酯的為對照，利用熒光分光光度計于490?nm光子激發下檢測584?nm的相對熒光發射光強度值（I_R），以三油酸甘油酯加入量m為橫坐標、I_R為縱坐標，作兩者的標準曲線，并得到線性擬合方程I_R=f(m)；

（7）以步驟（5）中測得芳香植物鮮花中精油的相對熒光強度值I_S替代步驟（6）線性擬合方程I_R=f(m)中的I_R，通過計算即可行知步驟（1）中所秤取的芳香植物鮮花中精油的質量m，其單位為mg；進而可算得待測芳香植物鮮花鮮花中的精油含量CR=(m/M)×0.001。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所指芳香植物鮮花是薰衣草、代代、梔子、桂花樹或中國水仙的鮮花。

4.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，設定超聲波發生儀頻率為20?kHz，發射功率為150?W，變幅桿伸至樣品液面下2?cm，以2?s開/?1?s關的間歇執行超聲波處理。

5.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，25?μg/mL的尼羅紅溶液配制方法為，稱取2.5?mg尼羅紅，用5?ml丙酮溶解，再用蒸餾水定容至100?ml。