[發明專利]一種檢測動植物油脂中抗氧化物質的方法

無效

• 申請號: 201210570745.2
• 申請日: 2012-12-26
• 公開（公告）號: CN103063770A
• 公開（公告）日: 2013-04-24
• 發明（設計）人: 張強;蘇印泉;朱銘強;張京芳;鄭冀魯
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

一、技術領域：

本發明屬于高效液相色譜分析技術領域，更詳細的說，是一種利用高效液相色譜和自由基檢測系統在線檢測動植物油脂中抗氧化物質的方法。

二、背景技術：

高效液相色譜(HPLC)是一種高效分離分析混合物中化合物的儀器和方法，配備不同的檢測器，可以檢測混合物中不同性質的化合物。常用的檢測器有：紫外吸收檢測器(UVD)、二極管陣列檢測器(DAD)、熒光檢測器(FLD)、示差折光檢測器(RID)、蒸發光散射檢測器(ELSD)、質譜檢測器(MSD)。這些檢測器均以化合物的某種化學物理性質檢測化合物，與化合物活性沒有緊密聯系。

動植物油脂中由于含有不飽和脂肪酸，極易氧化酸敗。含油脂食品在儲運加工中易發生氧化，油脂氧化所產生的產物會對含油脂食品的風味、色澤以及組織產生不良的影響，以至于縮短貨架期，降低這類食品的營養品質，危害人類身體健康。添加抗氧化劑是保護油脂和含油脂食物以延長保質期的重要手段。食品中抗氧化劑的檢測，是食品安全研究與技術領域不可或缺的部分。應用現有的檢測方法檢測油脂中抗氧化物質，要求知道抗氧化物質的結構和性質等，才能確定檢測方法參數，無法做到對未列入檢測項目的抗氧化物質的檢測。而且一般需要利用極性溶劑萃取后，才能進行HPLC分析，操作比較繁瑣。

鑒于以上種種情況，一種將高效液相色譜和自由基檢測系統聯用以快速檢測混合物中抗氧化活性化合物和抗氧化劑的方法逐步發展起來。該方法相當于在高效液相色譜已有的可見紫外檢測器的基礎上再加上抗氧化活性檢測器，這樣一次色譜分析即可得到混合物中各個化合物的抗氧化活性數據，檢測出已知的和未知的抗氧化物質。

這類方法在國內僅有8篇文章發表，專利申請1項。朱卉等選取H₂0₂及O₂^·-為檢測自由基，檢測了一種藥品中抗氧化活性化合物。吳雷等以O₂^·-為檢測自由基，檢測了中藥材麥冬中的抗氧化活性化合物。H₂O₂和和O₂^·-不穩定，系統需要用魯米諾和連苯三酚或者過氧化氫，因此體系反應復雜，穩定性和靈敏度不理想。王小淞等選取DPPH自由基為檢測用自由基，檢測了黃芩根提取物中的抗氧化活性成分。張雷等、傅茂潤等也以相似的的方法檢測了茶葉、紫薯中的抗氧化物質。DPPH自由基穩定，系統組成與使用ABTS自由基類似，但靈敏度不及ABTS自由基。裴世春等、高翔等、耿雪飛等利用ABTS自由基聯用HPLC檢測植物材料中抗氧化物質。西北農林科技大學申請了利用ABTS自由基檢測混合物中抗氧化活性物質的發明專利(申請號201110330342.6)。但是以上所有方法均使用反相HPLC色譜柱和水、甲醇、乙腈等極性洗脫劑，對動植物油脂等弱極性材料分離效果欠佳，因此未用于檢測動植物油脂中的抗氧化物質。

三、發明內容：

本發明的目的在于提供一種以高效液相色譜和自由基檢測系統聯用的裝置和方法，檢測動植物油脂中的抗氧化物質，為動植物油脂中抗氧化物質(包括已知的和未知的)的檢測提供一種靈敏度高，重復性好，操作簡便，檢測快速的方法。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案為：

一種檢測動植物油脂中抗氧化物質的方法，是利用高效液相色譜和自由基檢測系統分析油脂中抗氧化物質的分析方法，包括以下裝置，參數設置和分析方法：

(1)裝置：所需儀器有一套高效液相色譜儀HPLC(包括高壓泵；進樣器；可見紫外檢測器；記錄儀，配以硅膠液相色譜柱)，一臺可見檢測器，一個緩沖器，一臺信號記錄儀，一臺高壓泵，一個HPLC用“三通”和HPLC用塑料(PEEK)管道。

HPLC的可見紫外檢測器連接到一個HPLC用“三通”，“三通”另一路經緩沖器連接至輸送自由基溶液的高壓泵，第三路經由反應圈(HPLC用連接管道，材料為PEEK，內徑小于等于0.25mm，長度為10.0-30.0m)連接至可見吸收檢測器和一個信號記錄器。

(2)參數設置：

①自由基選用Galvinoxyl自由基(CAS：2370-18-5)，濃度為0.002mmol/L，溶劑為正己烷，流速0.8-1.5mL/min，可見檢測器檢測波長為425nm。

②高效液相色譜參數設定。洗脫劑流速0.8-1.2mL/min。洗脫劑為正己烷和叔丁基甲醚，叔丁基甲醚含量最高可達到100％。檢測器波長依檢測對象和目的設置。

(3)分析方法：