[發(fā)明專利]一種快速檢測細胞中谷胱甘肽的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210568880.3
• 申請日: 2012-12-24
• 公開（公告）號: CN102978276A
• 公開（公告）日: 2013-03-20
• 發(fā)明（設計）人: 陳燕婷
• 申請（專利權(quán)）人: 陳燕婷
• 主分類號: C12Q1/26
• 分類號: C12Q1/26;C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21;C12N9/02;G01N21/33
• 代理公司: 廣西南寧匯博專利代理有限公司 45114
• 代理人: 鄧曉安

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)學檢驗測定技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種快速檢測細胞中谷胱甘肽的方法。

背景技術(shù)

谷胱甘肽（glutathione,GSH）是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸結(jié)合，含有巰基的的三肽，具有抗氧化作用和整合解毒作用。半胱氨酸上的巰基為谷胱甘肽活性基團（故谷胱甘肽常簡寫為G-SH），易與某些藥物（如撲熱息痛）、毒素（如自由基、碘乙酸、芥子氣，鉛、汞、砷等重金屬）等結(jié)合，而具有整合解毒作用。故谷胱甘肽（尤其是肝細胞內(nèi)的谷胱甘肽）能參與生物轉(zhuǎn)化作用，從而把機體內(nèi)有害的毒物轉(zhuǎn)化為無害的物質(zhì)，排泄出體外。谷胱甘肽還能幫助保持正常的免疫系統(tǒng)的功能。

圖.谷胱甘肽分子結(jié)構(gòu)

從20世紀50年代起，研究者就開始建立谷胱甘肽的各種測定方法，直到本世紀初，仍有很多改進方法和新穎的技術(shù)方案不斷涌現(xiàn)。縱觀谷胱甘肽的測定方法，形式多樣，原理也不盡相同。在科學研究和相關(guān)臨床檢測中，需要對谷胱甘肽的濃度進行檢測，目前常用的谷胱甘肽GSH的檢測方法有以下幾種類型：目前測定谷胱甘肽含量的方法有多種，其中常用的有改良Tietze還原酶法、Griffith法、量熱法、色譜法、分光光度法、毛細管電泳法、熒光光度法等。酶法是建立在依靠谷胱甘肽還原酶的催化反應機理，但是目前酶法且經(jīng)常偶聯(lián)DTNB方法，經(jīng)濟成本比較高。也有NADP⁺的再生系統(tǒng)引入了酶法測定谷胱甘肽的方法，但其測定效果不理想，且需要高技術(shù)手段完成。

專利CN01802073.9，公布了一種酶法快速測定氧化型和還原型谷胱甘肽，通過將GSH誘捕劑處理樣品的步驟引入到采用氧化劑和谷胱甘肽還原酶的常規(guī)酶法分析中，可同時定量測定氧化型和還原型谷胱甘肽(GSSG·GSH)。用于快速定量測定氧化型和還原型谷胱甘肽的方法包括下列步驟：(i)獲取組織樣品然后制備代謝阻斷的組織勻漿；(ii)采用和不用GSH誘捕劑制備等體積的勻漿級分，并將磷酸緩沖液、蒸餾水和NADPH溶液加入到每個級分中；(iii)將谷胱甘肽還原酶和氧化劑加入到每個級分中啟動反應；和(iv)采用和不用GSH誘捕劑測定含有級分的反應混合物吸光度以分別定量測定氧化型谷胱甘肽(GSSG)和總谷胱甘肽，然后從總谷胱甘肽中減去GSSG量從而確定還原型谷胱甘肽(GSH)的量。根據(jù)本發(fā)明，氧化型和還原型谷胱甘肽的量能同時以一種簡便和準確的方式測定，這使得本發(fā)明實際應用在由細胞氧化/還原態(tài)異常所引發(fā)的疾病的診斷和治療成為可能。

專利CN200510025338.3，公布了一種檢測人外周靜脈血單核細胞中谷胱甘肽含量的方法，涉及一種檢測人外周靜脈血單核細胞(PMN)中谷胱甘肽(GSH)含量的方法，包括稀釋，分離，沉淀靜脈血后，用紫外分光光度儀于波長312－470nm處，測定光密度值，計算PMN細胞中的GSH含量。本方法的關(guān)鍵是，在腫瘤患者進行治療方案選擇前，對患者個體進行GSH定量測定，根據(jù)患者外周血單核細胞內(nèi)的GSH含量，選擇適宜的治療方案，并預測其療效。根據(jù)本方法檢測結(jié)果，患者可選擇在進行放療或化療同時，采用降低GSH的藥物，以促使細胞內(nèi)的GSH含量下降，使腫瘤細胞的敏感性增加，療效提高。

專利CN200510047285.5，公布了一種同時測定細胞活性氧與還原型谷胱甘肽的檢測方法，該發(fā)明涉及細胞內(nèi)活性氧與還原型谷胱甘肽的檢測，具體地說是一種同時測定細胞活性氧與還原型谷胱甘肽的檢測方法，采用微流控芯片對細胞活性氧和還原型谷胱甘肽同時測定，微流控芯片電泳采用的緩沖液濃度為20－50mM，緩沖液pH值為8.0－10.1，分離電壓為200－450V/cm，檢測點距進樣通道和分離通道交叉處為1.0－3.0cm。本發(fā)明的檢測方法樣品用量非常少(3－4uL)，在微流控芯片上實現(xiàn)了對細胞內(nèi)活性氧和還原型谷胱甘肽的同時測定，分析時間僅用27秒，且檢測靈敏度較高(amol－zmol)。

專利200710024729.2，公布了谷胱甘肽診斷/測定試劑盒及谷胱甘肽的濃度測定方法，該發(fā)明涉及一種利用酶比色法技術(shù)的谷胱甘肽診斷/測定試劑盒，同時該發(fā)明還涉及測定谷胱甘肽濃度的方法原理、試劑的組成及成分，屬于醫(yī)學/食品檢驗測定技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的試劑盒主要成分包括：緩沖液、輔酶、甲醛、甲醛脫氫酶及穩(wěn)定劑；通過將樣品與試劑按一定的體積比混合，使之發(fā)生一系列的酶促反應，再將反應物置于紫外/可見光分析儀下，檢測主波長340nm處吸光度上升的程度/速度，從而測算出谷胱甘肽的濃度大小。