[發明專利]一種水產弧菌快速藥敏檢測試劑盒有效

申請號：	201210568362.1	申請日：	2012-12-24
公開（公告）號：	CN103013822A	公開（公告）日：	2013-04-03
發明（設計）人：	刁菁;楊秀生;葉海斌;薛蓮;蓋春蕾	申請（專利權）人：	山東省海水養殖研究所
主分類號：	C12M1/34	分類號：	C12M1/34;C12Q1/20;C12R1/63
代理公司：	青島海昊知識產權事務所有限公司 37201	代理人：	曾慶國
地址：	266002 山***	國省代碼：	山東;37
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種水產弧菌快速檢測試劑盒
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【說明書】：

技術領域

本發明屬于水產致病微生物體外診斷技術領域，具體涉及一種水產弧菌快速藥敏檢測試劑盒。

背景技術

近年來隨著水產養殖業的快速發展，水產養殖動物病害問題也日益突出，其中細菌性疾病已在世界范圍內對漁業經濟造成了巨大的損失。弧菌是一大群菌體短小、極生鞭毛、能運動、無芽胞的短桿狀彎曲成弧形的革蘭氏陰性菌，隸屬于弧菌科、弧菌屬。弧菌廣泛分布于自然界，以水體中分布居多。大量研究表明，多種弧菌可引起海水養殖魚類、貝類及甲殼類等經濟動物的流行性和暴發性死亡，主要包括副溶血弧菌、燦爛弧菌、鰻弧菌、溶藻弧菌、哈維氏弧菌等。弧菌病給水產養殖業造成巨大經濟損失，并且該病還會導致野生海水魚類、貝類及甲殼類的死亡，進而威脅海洋自然生物資源。因此，對該疾病的預防與控制研究一直備受國內外研究人員的關注，是海水養殖動物病害的主要研究領域之一。目前，在水產養殖生產過程中，抗生素的使用仍是解決水產養殖動物弧菌病的重要手段，它能在短期起到良好的治療效果，極大地降低養殖業的經濟損失，但由于抗生素在疾病防治上的廣泛和長期使用，耐藥性弧菌的種類及數量得到不斷攀升。近年來，抗藥性弧菌菌株也不斷地被分離到，在這種情況下如果無選擇地盲目使用抗生素，不但得不到理想的治療效果，反應會使得菌株的耐藥性進一步加劇，從而給水產養殖業甚至人類生命健康安全帶來更為嚴重的危害。因此，為了有針對性地使用抗生素藥物以達到理想的治療效果，對病原微生物開展抗生素敏感試驗，以獲知菌株的耐藥特性，對于指導臨床科學、合理、準確用藥，避免疾病的暴發流行及微生物耐藥性加劇起著關鍵性的作用。

目前，在水產細菌病防治領域，藥敏檢測方法主要采用K-B紙片法與肉湯稀釋法，其中K-B紙片法一般須在專業的微生物實驗室條件下進行，需要具備專業知識的人員來操作完成，存在操作繁瑣、工作量大、周期長等問題，而且無法獲得藥物的最小抑菌濃度（MIC）值。常規的肉湯稀釋法雖然可以測定藥物的MIC值，但有時需要專業的儀器設備輔助，實驗周期長，且對結果判讀不夠直觀。因此，以上兩種方法都不適合在水產養殖生產中推廣應用。

發明內容

本發明的目的是提供一種能應用于水產養殖現場的弧菌快速藥敏檢測試劑盒，從而彌補現有技術的不足。

本發明檢測試劑盒，包括有檢測板、菌體采集工具、增菌液、藥敏檢測培養基、比濁管、接種滴管及比色卡；其中檢測板包含用于藥敏檢測的、包被含有不同濃度藥物和顯色指示劑的檢測孔，所述顯色指示劑為阿爾瑪藍。

所述的菌體采集工具為無菌接種環或無菌吸管；

所述的增菌液的，其組份及濃度如下：牛肉浸粉6?g/L、可溶性淀粉1.5?g/L、酪蛋白水解物17.5g/L、NaCl?15g/L、CaCl_2?2.8?mg/L、MgCl_2??4mg/L、魚肉蛋白胨10g/L。

所述的藥敏檢測培養基的組成如下：牛肉浸粉6?g、可溶性淀粉1.5?g、酪蛋白水解物17.5?g、NaCl?15g、2.8?mg?CaCl₂、4?mg?MgCl₂、蒸餾水1?L。

所述的包被了含有藥物的顯色指示劑的檢測孔，是將溶解有藥物的海藻糖水溶液與顯色指示劑阿爾瑪藍混合，加入到檢測孔中進行陰干制成。

檢測板還包含有用做質量控制的檢測孔和/或用作生長對照的檢測孔。?

其中質量控制的檢測孔和生長對照的檢測孔，是將海藻糖水溶液和顯色指示劑阿爾瑪藍混合，加入到檢測孔中進行陰干制成。

上述的一種檢測板，包含有96個檢測孔，呈8行×12列排列。

所述的藥物為氨芐青霉素、氟苯尼考、阿米卡星、四環素、土霉素、強力霉素、多粘菌素B、復方新諾明、諾氟沙星、恩諾沙星或利福平。

利用本藥敏檢測試劑盒進行檢測的方法按照以下步驟進行：