[發(fā)明專利]一種水產(chǎn)弧菌快速藥敏檢測試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210568362.1
• 申請日: 2012-12-24
• 公開（公告）號: CN103013822A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 刁菁;楊秀生;葉海斌;薛蓮;蓋春蕾
• 申請（專利權(quán)）人: 山東省海水養(yǎng)殖研究所
• 主分類號: C12M1/34
• 分類號: C12M1/34;C12Q1/20;C12R1/63
• 代理公司: 青島海昊知識產(chǎn)權(quán)事務(wù)所有限公司 37201
• 代理人: 曾慶國

1.一種水產(chǎn)弧菌快速藥敏檢測試劑盒，包括有檢測板、菌體采集工具、增菌液、藥敏檢測培養(yǎng)基、比濁管、接種滴管及比色卡；其中檢測板包含有用于藥敏檢測的、包被了含有不同濃度藥物和顯色指示劑的檢測孔，所述顯色指示劑為阿爾瑪藍(lán)。

2.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述的菌體采集工具為無菌接種環(huán)或無菌吸管。

3.用于權(quán)利要求1所述的試劑盒的增菌液，其組份及濃度如下：牛肉浸粉6?g/L、可溶性淀粉1.5?g/L、酪蛋白水解物17.5g/L、NaCl?15g/L、CaCl₂2.8?mg/L、MgCl_2?4?mg/L、魚肉蛋白胨10g/L。

4.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述的藥敏檢測培養(yǎng)基的組成如下：牛肉浸粉6?g、可溶性淀粉1.5?g、酪蛋白水解物17.5?g、NaCl?15g、2.8?mg?CaCl₂、4?mg?MgCl₂、蒸餾水1?L。

5.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述的包被了含有藥物的顯色指示劑的檢測孔，是將溶解有藥物的海藻糖水溶液與顯色指示劑阿爾瑪藍(lán)混合，加入到檢測孔中進(jìn)行陰干制成。

6.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述的檢測板還包含有用做質(zhì)量控制的檢測孔和/或生長對照的檢測孔。?

7.如權(quán)利要求6所述的試劑盒，其特征在于所述的質(zhì)量控制的檢測孔和生長對照的檢測孔，是將海藻糖水溶液和顯色指示劑阿爾瑪藍(lán)混合，加入到檢測孔中進(jìn)行陰干制成。

8.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述的檢比色卡上劃分有細(xì)菌增殖陽性對照區(qū)及細(xì)菌增殖陰性對照區(qū),其中細(xì)菌增殖陰性對照區(qū)到細(xì)菌增殖陽性對照區(qū)的顏色從藍(lán)色（RGB44、19、185）至粉紅色（RGB：255，143，218）漸變。

9.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述的藥物為氨芐青霉素、氟苯尼考、阿米卡星、四環(huán)素、土霉素、強(qiáng)力霉素、多粘菌素B、復(fù)方新諾明、諾氟沙星、恩諾沙星或利福平。

10.權(quán)利要求1所述的試劑盒進(jìn)行檢測的方法，包括如下的步驟：

1）利用無菌接種環(huán)挑取待檢弧菌單個(gè)菌落，置于增菌液管內(nèi)攪動(dòng)均勻，然后將增菌液管置于28?℃培養(yǎng)箱內(nèi)震蕩培養(yǎng)，直至增菌液濁度與0.5麥度比濁管的濁度相當(dāng)；

2）將用增菌液擴(kuò)大培養(yǎng)后的菌液以藥敏檢測培養(yǎng)基將其稀釋1500倍，然后利用接種滴管分別滴加于藥敏檢測和生長對照的檢測孔內(nèi)，每孔滴加100μl菌液；而質(zhì)量控制的檢測孔內(nèi)加入100μl無菌的藥敏檢測培養(yǎng)基；

3）將檢測板置于28?℃培養(yǎng)箱內(nèi)避光培養(yǎng)6-10h，取出檢測板觀察微孔內(nèi)的顏色，對照藥敏比色卡進(jìn)行藥敏結(jié)果判讀，判讀標(biāo)準(zhǔn)如下：

A、若質(zhì)控區(qū)顏色呈藍(lán)色，則試驗(yàn)有效，可以繼續(xù)進(jìn)行判讀；若呈粉紅色，則試驗(yàn)無效，需重新進(jìn)行檢測；

B、若生長對照區(qū)呈粉色，則可以繼續(xù)進(jìn)行MIC判讀；若生長對照區(qū)呈藍(lán)色則需將檢測板置于28℃培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)，至顏色變?yōu)榉奂t色后，再進(jìn)行MIC判讀；

C、若質(zhì)控區(qū)呈藍(lán)色，生長對照區(qū)呈粉紅色，則判讀各列不同藥物對菌體的MIC，其中每列與比色卡上細(xì)菌增殖陰性對照區(qū)內(nèi)顏色相同微孔的最低藥物包被濃度即為待測弧菌的MIC。