[發明專利]P16免疫細胞化學試劑盒及其制備用多肽序列

有效

• 申請號: 201210567622.3
• 申請日: 2012-12-24
• 公開（公告）號: CN103076453A
• 公開（公告）日: 2013-05-01
• 發明（設計）人: 狄文;何以豐;張梅瑩
• 申請（專利權）人: 何以豐;狄文
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;C07K7/08;C07K14/47
• 代理公司: 上海新天專利代理有限公司 31213
• 代理人: 王敏杰

1.一種P16免疫細胞化學試劑盒，其特征在于：該試劑盒由第（1）-（6）號組分組成；其中：

第（1）號組分所含的第一抗體是三種小鼠抗人單克隆IgG抗體的混合物，三者濃度相同，按體積比1：1：1的比例混合；

第（2）號組分所含的第二抗體是偶聯有辣根過氧化物酶的兔抗小鼠IgG多克隆抗體；

第（3）號組分所含的酶底物是二氨基聯苯胺溶液；

第（4）號組分所含的陽性對照品是兔腎細胞RK13，經過慢病毒感染后，其基因組中整合有一段可表達的DNA序列D；由該序列轉錄翻譯的產物為可以被上述三種單抗同時識別的多肽片段；

第（5）號組分所含的陰性對照品是不表達人P16蛋白的兔腎細胞RK13；

第（6）號組分所含的緩沖液為pH=7.4的磷酸緩沖液；

2.根據權利要求1所述的P16免疫細胞化學試劑盒，其特征在于：所述的構成第（1）號組分中的三個單克隆抗體分別由多肽A、B、C免疫小鼠，按常規單克隆抗體制備方法制備，并經過單次或多次篩選得到。

多肽A、B、C的具體序列信息如下：

多肽A（即：序列表中的SEQ?ID?NO.1）：MEPAAGSSMEPSADWAAAAAALPN

多肽B（即：序列表中的SEQ?ID?NO.2）：ARGRVEEVRALLEAGAAAAP

多肽C（即：序列表中的SEQ?ID?NO.3）：ALPNAPNSYGRRPIQVAAAAGSSME

上述多肽序列中，各單字母縮寫的意義如下：G甘氨酸，A丙氨酸，V纈氨酸，L亮氨酸，I異亮氨酸，F苯丙氨酸，W色氨酸，Y酪氨酸，D天冬氨酸，H組氨酸，N天冬酰胺，E谷氨酸，K賴氨酸，Q谷氨酰胺，M甲硫氨酸，R精氨酸，S絲氨酸，T蘇氨酸，C半胱氨酸，P脯氨酸。

3.根據權利要求1所述的P16免疫細胞化學試劑盒，其特征在于：在所述的第（4）號組分中，作為陽性對照品的RK13細胞基因組中含有一段可表達的序列D：

DNA序列D（即：序列表中的SEQ?ID?NO.4）的序列信息如下：

atggcgggga?gcagcatgga?gccttcggag?gaggaggagg?aggtgcgggc?gctgctggag

gaggaggagg?aggagaggcc?gatccaggtc?atgatgatgg?gcgaggagga?ggaggagccg

aatagttacg?gtcggaagga?ggaggaggag?gaggtgcggg?cgctgctgga?ggaggaggag

gaggagccga?atagttacgg?tcggaagtga

在上述序列D中：a指腺嘌呤，t指胸腺嘧啶，g指鳥嘌呤，c指胞嘧啶。