[發明專利]一種利用動物乳腺生產人血清白蛋白的方法及其表達載體

在審

• 申請號: 201210567600.7
• 申請日: 2012-12-24
• 公開（公告）號: CN103898157A
• 公開（公告）日: 2014-07-02
• 發明（設計）人: 曾溢滔;曾凡一;蔡勤;方彧聃;黃淑幀
• 申請（專利權）人: 上海市兒童醫院;上海滔滔轉基因工程股份有限公司
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/14;C07K14/765
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 薛琦;沈利

本發明公開了一種利用轉基因動物的乳腺生產人血清白蛋白的方法及其表達載體。本發明的方法，包括利用載體將人血清白蛋白基因表達盒轉入哺乳動物基因組中獲得轉基因動物，從轉基因動物乳汁中獲得人血清白蛋白，所述的人血清白蛋白基因表達盒從5’到3’依次包括啟動子、人血清白蛋白基因和終止子，還包括人血清白蛋白基因3’旁側序列M2和β?酪蛋白基因的3’旁側序列B3中的一種或兩種，M2或B3位于終止子之后。本發明的方法，在動物的乳汁中人血清白蛋白的濃度至少可達到4.6?6.7g/L，完全能夠達到商業利用的水平。從轉基因牛的牛奶中分離獲得人血清白蛋白給人血清白蛋白的生產提供了一種低成本，高產量的好方法。

技術領域

本發明涉及轉基因技術，具體涉及一種人血清白蛋白的表達水平高的利用轉基因動物的乳腺生產人血清白蛋白的方法以及其中所用到的表達載體。

背景技術

人血清白蛋白是血漿中最為豐富的蛋白質,對維持血漿膠體滲透壓、營養和體內物質運輸等具有重要的作用,并廣泛應用于燒傷、休克、營養不良、慢性消耗性疾病等的治療。目前臨床上所需的白蛋白，幾乎全部采用獻血員的血漿。然而由于血源不足的困難，尤其是采用獻血員的血漿有感染肝炎HIV1病毒、艾滋病毒等危險，因此大量生產安全的白蛋白一直是一個難以達到又迫切需要達到的目標。

《山羊β酪蛋白基因啟動子指導人血清白蛋白基因在小鼠組織中的特異性表達》（遺傳HEREDITAS(Beijing)23(6):518~520,2001），介紹了一種山羊beta酪蛋白基因啟動子指導人血清白蛋白基因的表達載體，利用該載體制備轉基因動物，通過轉基因動物來生產人血清白蛋白。但是該技術中，人血清白蛋白的產量極低，達不到具有商業意義的濃度水平。

發明內容

本發明要解決的技術問題是針對現有的利用轉基因動物的乳腺生產人血清白蛋白的方法中人血清白蛋白的表達水平低下的不足，提供一種人血清白蛋白的表達水平高的利用轉基因動物的乳腺生產人血清白蛋白的方法以及其中所用到的表達載體。

為此，本發明的技術方案之一是：一種利用轉基因動物的乳腺組織生產人血清白蛋白的方法，包括利用含有人血清白蛋白基因表達盒的載體將人血清白蛋白基因表達盒轉入哺乳動物基因組中獲得轉基因動物，使該轉基因動物分泌乳汁，從乳汁中獲得人血清白蛋白，其中，所述的人血清白蛋白基因表達盒還包括人血清白蛋白基因3’旁側序列M2和β-酪蛋白基因的3’旁側序列B3中的一種或兩種。

本發明中，所述的人血清白蛋白基因3’旁側序列M2是本領域常規，較佳的，所述M2的序列如Genebank數據庫中的序列AC108157.3的第86983位到第93655位所示。

所述的β-酪蛋白基因的3’旁側序列B3是本領域常規，較佳的是牛β-酪蛋白基因的3’旁側序列B3或者羊β-酪蛋白基因的3’旁側序列B3。更佳的，所述B3的序列如Genebank數據庫中的序列AY154895.1的第15803位到第21170位所示。

所述的人血清白蛋白基因3’旁側序列M2或β-酪蛋白基因的3’旁側序列B3在人血清白蛋白基因表達盒中位于終止子之后。

本發明中，所述的人血清白蛋白基因表達盒是本領域常規，包括啟動子、人血清白蛋白基因和終止子。其中，所述的啟動子是本領域常規，只要能夠在哺乳動物細胞中啟動下游基因的表達即可，較佳的是在哺乳動物乳腺組織中啟動表達效率高的啟動子，較佳的是β-酪蛋白基因啟動子，更佳的是山羊β-酪蛋白基因啟動子。

所述的人血清白蛋白基因是本領域常規，較佳的是人血清白蛋白的編碼序列或者是含有內含子I的人血清白蛋白的編碼序列。更佳的，所述hAlbcDNA片段的序列如Genebank數據庫中的序列NM 000477.5所示。

所述的終止子是本領域常規。