[發明專利]一種制備丙氨酸轉氨酶的方法及應用無效
| 申請號： | 201210567473.0 | 申請日： | 2012-12-25 |
| 公開（公告）號： | CN103014033A | 公開（公告）日： | 2013-04-03 |
| 發明（設計）人： | 肖飛;黃薇;張傳寶;王大光 | 申請（專利權）人： | 肖飛 |
| 主分類號： | C12N15/54 | 分類號： | C12N15/54;C12N15/70;C12N9/10;C07K16/40;G01N33/53 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 100062 北京市崇文區東*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 制備 丙氨酸 轉氨酶 方法 應用 | ||
1.一種制備丙氨酸轉氨酶的方法，其特征在于，該方法包括：
1)改造并全基因合成人源化丙氨酸轉氨酶編碼基因序列，去除大腸桿菌稀有密碼子；
2)將步驟1)中改造后的丙氨酸轉氨酶編碼基因序列插入表達載體中，并用大腸桿菌菌株轉化表達；
3)將轉化表達菌株接種于LB培養基，IPTG誘導；
4)所得菌體破菌，離心分離，過Ni-NTA柱純化；
其中，步驟1)中改造后的全基因合成人源化丙氨酸轉氨酶編碼基因序列為：
ATGGCTTCTT?CTACTGGTGA?TCGTTCTCAG?GCTGTTCGTC?ATGGTCTGCG?TGCGAAAGTT
CTGACCCTGG?ACGGCATGAA?CCCGCGTGTT?CGTCGCGTCG?AATACGCCGT?GCGTGGCCCG
ATCGTTCAGC?GTGCTCTGGA?ACTGGAACAA?GAACTGCGTC?AGGGCGTTAA?AAAGCCGTTC
ACCGAGGTTA?TCCGCGCCAA?CATCGGCGAT?GCCCAGGCTA?TGGGTCAGCG?TCCTATCACC
TTCCTGCGCC?AGGTCCTGGC?GCTGTGCGTA?AACCCAGACC?TGCTGAGCTC?TCCGAACTTC
CCGGACGACG?CTAAGAAACG?TGCGGAACGC?ATCCTGCAGG?CATGCGGTGG?CCACAGCCTG
GGCGCTTACA?GCGTTTCCTC?CGGTATCCAG?CTGATTCGTG?AAGATGTTGC?CCGTTACATC
GAGCGCCGTG?ATGGCGGTAT?CCCGGCGGAC?CCTAACAACG?TATTCCTGTC?TACCGGTGCG
TCCGATGCCA?TTGTTACCGT?TCTGAAGCTG?CTGGTGGCTG?GCGAGGGTCA?CACCCGTACC
GGTGTCCTGA?TTCCGATTCC?ACAGTATCCG?CTGTATTCTG?CTACTCTGGC?TGAACTGGGT
GCGGTGCAGG?TAGACTATTA?CCTGGATGAG?GAGCGCGCTT?GGGCGCTGGA?CGTCGCAGAG
CTGCACCGCG?CACTGGGCCA?GGCACGTGAC?CACTGCCGTC?CGCGTGCGCT?GTGCGTGATT
AACCCGGGCA?ACCCGACGGG?CCAAGTTCAG?ACCCGTGAAT?GCATCGAAGC?TGTGATTCGT
TTTGCTTTCG?AAGAACGTCT?GTTCCTGCTG?GCGGACGAAG?TTTATCAGGA?CAACGTTTAC
GCAGCCGGTA?GCCAGTTTCA?TTCTTTCAAG?AAAGTTCTGA?TGGAAATGGG?TCCGCCGTAT
GCGGGTCAGC?AAGAACTGGC?ATCCTTCCAC?TCTACCTCCA?AAGGTTATAT?GGGTGAGTGT
GGCTTCCGTG?GTGGTTATGT?TGAAGTAGTT?AATATGGACG?CGGCTGTGCA?GCAGCAGATG
CTGAAGCTGA?TGTCTGTGCG?CCTGTGCCCG?CCTGTGCCGG?GTCAAGCCCT?GCTGGATCTG
GTTGTGTCTC?CGCCTGCTCC?GACTGATCCG?TCCTTCGCAC?AATTCCAGGC?TGAGAAACAG
GCCGTTCTGG?CGGAACTGGC?AGCGAAAGCC?AAACTGACGG?AACAAGTGTT?CAACGAAGCG
CCGGGTATCT?CCTGCAATCC?GGTACAAGGC?GCGATGTATA?GCTTCCCGCG?CGTTCAGCTG
CCGCCACGCG?CAGTAGAACG?TGCACAGGAA?CTGGGCCTGG?CTCCGGACAT?GTTCTTCTGT
CTGCGCCTGC?TGGAAGAAAC?CGGTATTTGC?GTTGTACCTG?GCAGCGGCTT?CGGTCAACGT
GAAGGTACTT?ACCACTTCCG?TATGACCATC?CTGCCTCCGC?TGGAAAAACT?GCGTCTGCTG
CTGGAAAAGC?TGTCCCGTTT?TCACGCGAAA?TTCACTCTGG?AATATTCTTA?G
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