[發明專利]光交聯功能化的基因芯片及其制備方法及檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201210566955.4
• 申請日: 2012-12-24
• 公開（公告）號: CN103898194A
• 公開（公告）日: 2014-07-02
• 發明（設計）人: 何建安;顧大勇;趙芳;史蕾;趙純中;劉春曉;徐云慶
• 申請（專利權）人: 深圳國際旅行衛生保健中心
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/14;C12Q1/04;C40B40/06;C40B50/14;C12R1/445;C12R1/19;C12R1/63;C12R1/085;C12R1/42;C12R1/01
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 何平

技術領域

本發明涉及分子生物學技術領域，特別是涉及一種光交聯功能化的基因芯片及其制備方法及檢測試劑盒。

背景技術

食源性致病微生物是影響食品質量和安全的主要因素之一，據不完全統計發達國家每年有三分之一以上的人群感染食源性疾病。近年來，我國的廣東、北京、上海等地相繼出現食源性致病微生物中毒事件，引起其社會和我國政府部門的高度關注和重視。其中，在微生物性食物中毒事件中常見的重要致病菌為：沙門氏菌、副溶血性弧菌、蠟樣芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌、李斯特單核細胞增生菌、大腸桿菌O157:H7、霍亂弧菌、空腸彎曲菌等。屢次出現食源性致病微生物中毒事件，除了管理上的問題外，食源性致病微生物的檢測的限制也是一個重要的因素。因此，建立和完善食品中致病微生物快速定量檢測技術具有重要的現實意義。

國內外對于食源性致病微生物的檢測“金標準”是培養法，該方法需要經過分離培養、生化鑒定等步驟，其過程較為繁瑣、耗時，而且需要具備較高的實驗室標準。難以滿足在應對突發性食品安全公共事件上快速診斷的需要。隨著分子生物學的飛速發展，對食源性致病微生物的檢測鑒定已不再局限于對其外部形態及生理特性等常規檢驗上，而是從分子生物學水平上對食源性致病微生物的直接鑒定。

基因芯片技術是隨著“人類基因組計劃”的進展而發展起來的分子生物學領域一項里程碑式的重大技術革新。其基本原理是利用機械化的點樣技術將大量的DNA探針按照一定的陣列模式固定于芯片的特定位置，然后與待測的標記樣品按堿基配對原理雜交，借助共聚焦熒光檢測系統或者表面等離子共振的非標記檢測系統，獲取分析物的基因序列信息。目前，國內大量醫療機構，生物研究機構以及高校等相關的科研單位已經展開我國關于基因芯片的研究工作，取得了一批重要的研究成果。雖然基因芯片技術在微生物檢測方面有很多獨特的優勢，但還有不少問題和缺陷亟待解決。

傳統的基因芯片技術中的DNA探針固定方法通常需要對DNA探針進行氨基、巰基等功能化標記。另外每條探針鏈通常只有一個功能基團，位點少導致固定效率較低，從而進一步影響檢測信號。而且傳統的基因載體芯片存在抗蛋白質非特異性吸附能力差的問題。

發明內容

基于此，有必要提供一種固定效率較高且抗蛋白質非特異性吸附能力好的光交聯功能化的基因芯片及其制備方法。

一種光交聯功能化的基因芯片，包括支撐層、設置于所述支撐層上的引發劑層、共價結合于所述引發劑層上的聚寡聚乙二醇甲基丙烯酸甲酯層、連接于所述聚寡聚乙二醇甲基丙烯酸甲酯層側鏈末端的光交聯劑及固定于光交聯劑上的DNA探針；所述DNA探針為

序列為SEQ?ID?NO:1的金黃色葡萄球菌探針、

序列為SEQ?ID?NO:2的大腸桿菌O157:H7探針、

序列為SEQ?ID?NO:3的副溶血弧菌探針、

序列為SEQ?ID?NO:4的志賀氏菌探針、

序列為SEQ?ID?NO:5的單胞李斯特菌探針、

序列為SEQ?ID?NO:6的臘樣芽胞桿菌探針、

序列為SEQ?ID?NO:7的莢膜產氣桿菌探針、

序列為SEQ?ID?NO:8的霍亂弧菌探針、

序列為SEQ?ID?NO:9的空腸彎曲菌探針、

序列為SEQ?ID?NO:10的沙門氏菌探針以及

序列為SEQ?ID?NO:11的小腸結腸炎耶爾森菌探針中的至少一種。

在其中一個實施例中，所述支撐物層為表面鍍有金膜或銀膜的玻璃基片。

在其中一個實施例中，所述引發劑層包括稀釋劑和含聚乙二醇的引發劑，所述含聚乙二醇的引發劑與所述稀釋劑的摩爾比為1:1000～5:100；其中，

所述稀釋劑的結構式為：

所述含聚乙二醇的引發劑的結構式為：

在其中一個實施例中，所述聚寡聚乙二醇甲基丙烯酸甲酯層在干的狀態下的厚度為5～20nm。

在其中一個實施例中，所述光交聯劑為苯基疊氮類化合物、吖丙啶類化合物或二苯甲酮類化合物。