[發明專利]光交聯功能化的基因芯片及其制備方法及檢測試劑盒有效

申請號：	201210566955.4	申請日：	2012-12-24
公開（公告）號：	CN103898194A	公開（公告）日：	2014-07-02
發明（設計）人：	何建安;顧大勇;趙芳;史蕾;趙純中;劉春曉;徐云慶	申請（專利權）人：	深圳國際旅行衛生保健中心
主分類號：	C12Q1/68	分類號：	C12Q1/68;C12Q1/14;C12Q1/04;C40B40/06;C40B50/14;C12R1/445;C12R1/19;C12R1/63;C12R1/085;C12R1/42;C12R1/01
代理公司：	廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224	代理人：	何平
地址：	518045 廣東省深圳市***	國省代碼：	廣東;44
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摘要：
搜索關鍵詞：	交聯功能基因芯片及其制備方法檢測試劑盒
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【權利要求書】：

1.一種光交聯功能化的基因芯片，其特征在于，包括支撐層、設置于所述支撐層上的引發劑層、共價結合于所述引發劑層上的聚寡聚乙二醇甲基丙烯酸甲酯層、連接于所述聚寡聚乙二醇甲基丙烯酸甲酯層側鏈末端的光交聯劑及固定于光交聯劑上的DNA探針；所述DNA探針為

序列為SEQ?ID?NO:1的金黃色葡萄球菌探針、

序列為SEQ?ID?NO:2的大腸桿菌O157:H7探針、

序列為SEQ?ID?NO:3的副溶血弧菌探針、

序列為SEQ?ID?NO:4的志賀氏菌探針、

序列為SEQ?ID?NO:5的單胞李斯特菌探針、

序列為SEQ?ID?NO:6的臘樣芽胞桿菌探針、

序列為SEQ?ID?NO:7的莢膜產氣桿菌探針、

序列為SEQ?ID?NO:8的霍亂弧菌探針、

序列為SEQ?ID?NO:9的空腸彎曲菌探針、

序列為SEQ?ID?NO:10的沙門氏菌探針以及

序列為SEQ?ID?NO:11的小腸結腸炎耶爾森菌探針中的至少一種。

2.如權利要求1所述的光交聯功能化的基因芯片，其特征在于，所述支撐物層為表面鍍有金膜或銀膜的玻璃基片。

3.如權利要求1所述的光交聯功能化的基因芯片，其特征在于，所述引發劑層包括稀釋劑和含聚乙二醇的引發劑，所述含聚乙二醇的引發劑與所述稀釋劑的摩爾比為1:1000～5:100；其中，

所述稀釋劑的結構式為：

所述含聚乙二醇的引發劑的結構式為：

4.如權利要求1所述的光交聯功能化的基因芯片，其特征在于，所述聚寡聚乙二醇甲基丙烯酸甲酯層在干的狀態下的厚度為5～20nm。

5.如權利要求1所述的光交聯功能化的基因芯片，其特征在于，所述光交聯劑為苯基疊氮類化合物、吖丙啶類化合物或二苯甲酮類化合物。

6.一種光交聯功能化的基因芯片的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

利用自組裝技術將引發劑自組裝于支撐物層的表面上形成引發劑層；

將得到的表面覆蓋有引發劑層的支撐物層浸泡在含單體的反應溶液中，并于保護氣體氛圍下反應，得到共價結合于引發劑層上的聚寡聚乙二醇甲基丙烯酸甲酯層，其中，所述含有單體的反應溶液由2-2’聯吡啶、鹵化亞銅、抗壞血酸、寡聚乙二醇甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸羥乙酯及體積比為1:1的甲醇水溶液配制而成，所述單體為寡聚乙二醇甲基丙烯酸酯和甲基丙烯酸羥乙酯；

在所述聚寡聚乙二醇甲基丙烯酸甲酯層的側鏈末端引入光交聯劑；

將DNA探針點樣于光交聯劑上，于室溫下干燥后，在紫外光條件下進行交聯固定DNA探針，得到所述光交聯功能化的基因芯片，其中，所述DNA探針為序列為SEQ?ID?NO:1的金黃色葡萄球菌探針、序列為SEQ?ID?NO:2的大腸桿菌O157:H7探針、序列為SEQ?ID?NO:3的副溶血弧菌探針、序列為SEQ?ID?NO:4的志賀氏菌探針、序列為SEQ?ID?NO:5的單胞李斯特菌探針、序列為SEQ?ID?NO:6的臘樣芽胞桿菌探針、序列為SEQ?ID?NO:7的莢膜產氣桿菌探針、序列為SEQ?ID?NO:8的霍亂弧菌探針、序列為SEQ?ID?NO:9的空腸彎曲菌探針、序列為SEQ?ID?NO:10的沙門氏菌探針以及序列為SEQ?ID?NO:11的小腸結腸炎耶爾森菌探針中的至少一種。

7.如權利要求6所述的光交聯功能化的基因芯片的制備方法，其特征在于，所述寡聚乙二醇甲基丙烯酸酯的結構式為：

其中，n為6、8、10或12。

8.如權利要求6所述的光交聯功能化的基因芯片的制備方法，其特征在于，所述光交聯劑為苯基疊氮類化合物、吖丙啶類化合物或二苯甲酮類化合物。

9.一種含權利要求1～5任一項所述的光交聯功能化的基因芯片的檢測試劑盒。

10.如權利要求9所述的檢測試劑盒，其特征在于，還包括與檢測試劑盒中的DNA探針對應的引物，其中：

與序列為SEQ?ID?NO:1的金黃色葡萄球菌探針對應的兩條引物的序列為SEQ?ID?NO:12和SEQ?ID?NO:13；

與序列為SEQ?ID?NO:2的大腸桿菌O157:H7探針對應的兩條引物的序列為SEQ?ID?NO:14和SEQ?ID?NO:15；

與序列為SEQ?ID?NO:3的副溶血弧菌探針對應的兩條引物的序列為SEQ?ID?NO:16和SEQ?ID?NO:17；

與序列為SEQ?ID?NO:4的志賀氏菌探針對應的兩條引物的序列為SEQ?ID?NO:18和SEQ?ID?NO:19；

與序列為SEQ?ID?NO:5的單胞李斯特菌探針對應的兩條引物的序列為SEQ?ID?NO:20和SEQ?ID?NO:21；

與序列為SEQ?ID?NO:6的臘樣芽胞桿菌探針對應的兩條引物的序列為SEQ?ID?NO:22和SEQ?ID?NO:23；

與序列為SEQ?ID?NO:7的莢膜產氣桿菌探針對應的兩條引物的序列為SEQ?ID?NO:24和SEQ?ID?NO:25；