[發明專利]青枯病菌培養基及青枯病菌電激感受態細胞的制備方法

無效

• 申請號: 201210566872.5
• 申請日: 2012-12-25
• 公開（公告）號: CN103013883A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發明（設計）人: 樊穎倫;呂山花
• 申請（專利權）人: 聊城大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/01
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種青枯病菌培養基，其特征是，固體，每1升培養基中，各組分及含量為：500克新鮮馬鈴薯浸出液；Ca(NO₃)₂.4H₂O?1.0克；Na₂HPO₄.12H₂O?2.0克；蛋白胨5.0克；酵母浸出物1克；蔗糖15克；瓊脂15克。

2.根據權利要求1所述的青枯病菌培養基，其特征是，pH值6.8。

3.根據權利要求1或2所述青枯病菌培養基的制備方法，其特征是，步驟如下：

（1）取新鮮馬鈴薯（優選的，所用新鮮馬鈴薯為500克）切丁（優選1厘米見方的丁），放到盛有蒸餾水的燒杯（優選盛有800毫升蒸餾水的1升燒杯）中加熱至沸騰后，自然冷卻至室溫，用尼龍網（優選200目的尼龍網）過濾得馬鈴薯浸出液，棄掉馬鈴薯塊；

（2）將Ca(NO₃)₂.4H₂O、Na₂HPO₄.12H₂O、蛋白胨、酵母浸出物、蔗糖依次加入到馬鈴薯浸出液中，用蒸餾水定容到1升，調節pH值至6.8（優選的，用鹽酸或氫氧化鉀調節pH值）；

（3）用三角瓶（優選500毫升的三角瓶）進行分裝（優選的，各取200毫升培養基進行分裝）為5瓶，每瓶加入瓊脂3克，制作成固體培養基。

4.一種青枯病菌培養基，其特征是，液體，每1升培養基中，各組分及含量為：500克新鮮馬鈴薯浸出液；Ca(NO₃)₂.4H₂O?1.0克；Na₂HPO₄.12H₂O??2.0克；蛋白胨5.0克；酵母浸出物1克；蔗糖15克。

5.根據權利要求3所述的青枯病菌培養基，其特征是，pH值6.8。

6.根據權利要求4或5所述青枯病菌培養基的制備方法，其特征是，步驟如下：

（1）取新鮮馬鈴薯（優選的，所用新鮮馬鈴薯為500克）切丁（優選1厘米見方的丁），放到盛有蒸餾水的燒杯（優選盛有800毫升蒸餾水的1升燒杯）中加熱至沸騰后，自然冷卻至室溫，用尼龍網（優選200目的尼龍網）過濾得馬鈴薯浸出液，棄掉馬鈴薯塊；

（2）將Ca(NO3)2.4H2O、Na2HPO4.12H2O、蛋白胨、酵母浸出物、蔗糖依次加入到馬鈴薯浸出液中，用蒸餾水定容到1升，調節pH值至6.8（優選的，用鹽酸或氫氧化鉀調節pH值）；

（3）用三角瓶（優選500毫升的三角瓶）進行分裝（優選的，各取200毫升培養基進行分裝）為5瓶。

7.一種青枯病菌電激感受態細胞的制備方法，其特征是，步驟如下：

（1）將權利要求1或2所述固體培養基、權利要求4或5所述液體培養基、培養皿、10%甘油500毫升、10毫升離心管、50毫升離心管、1.5毫升離心管高溫滅菌，滅菌結束后，放到無菌超凈工作臺備用；

（2）取出青枯病菌菌株在固體培養基上劃線，30℃培養48小時；

（3）挑取2個單菌落，分別加入到盛有1毫升液體培養基的10毫升離心管中，在水浴搖床中以30℃?260rpm進行培養6小時；

（4）將培養的1毫升菌液加入到200毫升的液體培養基中，在水浴搖床中以30℃?300rpm進行培養,10小時后用可見光分光光度計監測550納米下吸光值OD550，等到吸光值OD550為0.57時立刻把三角瓶從水浴中取出，放到冰水混合物中進行冷卻約15分鐘；

（5）將冷卻的菌液分裝到50毫升離心管中，4℃?2400g離心10分鐘；

（6）棄掉上清液，加入30毫升10%預冷的甘油，蓋上蓋子后重新懸浮菌體；

（7）4℃?2400g離心10分鐘，棄掉上清液，加入30毫升10%預冷的甘油，蓋上蓋子后重新懸浮菌體；

（8）4℃?2400g離心10分鐘，棄掉上清液，加入1毫升10%預冷的甘油，重新懸浮菌體，分裝到1.5毫升離心管中，每個離心管分裝50微升，置超低溫冰箱中保存待用。

8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征是，步驟（1）的滅菌條件為121℃，15分鐘。

9.根據權利要求7所述的制備方法，其特征是，步驟（8）超低溫冰箱溫度為-80℃。